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facteur-coated croissance placement billes sur des explants du cerveau antérieur dorsal

Cette vidéo montre deux méthodes de préparation et de placer des perles, qui ont été revêtues d&#39;un facteur de croissance, sur des explants du cortex cérébral de développement. Ces perles peuvent être utilisées pour induire l&#39;expression des gènes dans l&#39;espace restreint sur le développement du tissu neural comme explants prosencéphale. Les méthodes sont donnés pour l&#39;utilisation de deux Affi-Gel perles et perles acrylique héparine.

Facteur-Coated Croissance Placement billes sur des explants du cerveau antérieur dorsal

C’est donc le premier type de perles que je vais utiliser. Il s’agit des perles de gel bleues. Ils sont doux.Je dois donc utiliser une pipette en verre à l’extrémité d’une pipette à bouche pour placer ces perles sur des X.Le deuxième type de perle que je vais démontrer sont les billes acryliques à l’héparine. Il s’agit d’un type de perle rigide, et je vais placer ces perles sur X explants à l’aide d’une aiguille en tungstène. Voici donc les tubes capillaires en verre que je vais d’abord faire fondre à l’aide du bec Bunsen.Ensuite, je les tirerai pour créer une pointe plus fine. Je tiens donc le tube capillaire au milieu de la flamme et je le roule au fur et à mesure que le tube fond. Je peux le sentir s’adoucir.Je vais le retirer de la flamme et ensuite le retirer. Je vais graver une ligne à travers le tube capillaire avec ce stylo à pointe de diamant afin que je puisse avoir une belle coupe droite. Ensuite, je vais polir à la flamme les extrémités pour le nettoyer.Je vais passer le capillaire à travers la flamme pour polir l’extrémité et réduire la taille de l’ouverture afin qu’elle puisse capturer une perle plutôt que la perle passant à travers le capillaire. Une chose importante à noter est que vous ne voulez pas maintenir le tube capillaire dans la flamme très longtemps. C’est en fait un passage très rapide, sinon il scellera.J’en fais généralement plusieurs parce que beaucoup d’entre eux se révèlent là où la pointe est scellée par la flamme. C’est difficile à contrôler, alors vous n’en faites que plusieurs. Voici un exemple où la pointe a été scellée.Voici un exemple de bonne pipette. J’ai pipeté 250 microlitres de billes d’agel dans ce tube einor, et je vais les laver cinq fois avec un millilitre de PBS pour éliminer la solution azi dans laquelle elles trempaient. J’attends environ trois minutes pour laisser les perles se déposer, puis j’aspire l’excès de PBS et je répète cette opération quatre fois de plus.Les perles ne sont pas encore tout à fait installées, donc les perles se sont stabilisées et je vais aspirer l’excès de PBS et répéter cela quatre fois. Et à la fin, j’ajouterai 300 microlitres de PBS et je commencerai à travailler avec les billes. Il s’agit d’une pipette à bouche standard et je vais simplement prendre le capillaire que j’ai tiré et l’enfoncer là-bas à environ un tiers de la hauteur.Tout d’abord, remplissez les pipettes avec du PBS. Il se remplit généralement par capillarité. Il s’agit donc d’un couvercle de boîte de culture de 30 millimètres et j’ai mis une gouttelette de perles en bleu.Et à côté se trouve une petite gouttelette de PBS. Et dans ce plat, voici cinq gouttelettes de microlitres de solution protéique. Dans ce cas, il s’agit de B et P quatre, mais vous pouvez utiliser une protéine de votre choix à l’aide de la pipette à bouche.Je vais transférer une perle de ce cercle bleu ici, la rincer une fois dans la gouttelette de PBS. Ensuite, je prendrai la perle avec la pipette à bouche et la placerai dans la gouttelette de solution protéique et l’incuberai à température ambiante pendant environ une heure ou à quatre degrés pendant plusieurs heures. Vous voyez donc un pool de perles dans PBS et je dois sélectionner des perles de la bonne taille.S’ils sont trop petits, ils passeront simplement par la pipette à bouche. Ils doivent simplement s’asseoir à la fin. Alors maintenant, vous voyez que j’ai choisi quelques perles là-bas, trois perles plus grandes et trois perles plus petites.Je vais utiliser les plus grosses billes dans l’expérience. Je vais maintenant transférer une grosse perle de la gouttelette de PBS vers la gouttelette de solution protéique. Et pour ce faire, je vais doucement retirer ma langue de la pipette à bouche.Il ne s’agit pas d’un mouvement de succion, mais simplement d’appliquer une pression négative. Ensuite, je vais le transférer, puis remettre ma langue sur la bouche. Tête de tuyau, sans souffler, mais en ajoutant simplement une pression positive pour pousser le battement de la fin.J’ai maintenant cinq billes dans la gouttelette de solution protéique, et je vais les incuber à quatre degrés pendant plusieurs heures, ou alternativement à température ambiante pendant une demi-heure à une heure. C’est donc le plat de culture qui contient la membrane qui flotte dans le milieu avec les aubergines que j’ai déjà disséquées. Je vais prendre la pointe de ma pipette et aspirer une partie du support.Je vais rincer les perles dans une gouttelette de support une seule fois immédiatement avant de placer la perle sur l’explan X. Ce sont les aiguilles en tungstène que je vais utiliser pour ramasser et placer les billes d’acrylique. Il s’agit de l’aiguille en tungstène et elle est maintenant dans son support.Et ce sont de belles pinces. À un angle de 45 degrés. Je vais utiliser mon aiguille en tungstène dans une pince pour soulever une perle de cette mare de PBS et transférer la perle sur une gouttelette de solution protéique.Comme je l’ai fait avec les perles agel. Comme pour les perles agel, j’ai rincé ces perles acryliques cinq fois dans du PBS et transféré une gouttelette sur cette plaque. Je vais ensuite utiliser mon aiguille de tungstène dans une pince pour transférer une perle sur une gouttelette de protéine et incuber comme je l’ai fait avec les billes de gel.C’est donc un coup de pouce. J’ai ma main droite fermement contre la table, et j’utilise mon index gauche pour stabiliser l’aiguille pendant que je descends dans le liquide, je touche légèrement une perle avec une aiguille et la retire lentement du liquide. Parfois, il tombe de l’aiguille, alors revenez simplement en chercher un autre.Maintenant, avec ma main gauche, j’ai la pince à angle de 45 degrés. Avec les pointes vers le bas, je touche la perle et l’aiguille au fluide et j’utilise. Utilisez la pointe de la pince pour appuyer doucement dessus.Alors maintenant, j’ai cinq perles en protéines. D’accord, donc avec ma main droite, j’ai l’aiguille en tungstène dans la perle, et ma main gauche, ma pince à nouveau avec la pointe vers le bas de la même manière que je les repousse des quatre, je vais le refaire ici sur l’explan x. Incuber à 37 degrés et le temps dépend d’un dosage particulier.

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Research

JoVE Journal

Biology

Growth Factor-Coated Bead Placement on Dorsal Forebrain Explants

University of California, Irvine (UCI).  Cette vidéo montre deux méthodes de préparation et de placer des perles, qui ont été revêtues d'un facteur de croissance, sur des explants du cortex cérébral de développement. Ces perles peuvent être utilisées pour induire l'expression des gènes dans l'espace restreint sur le développement du tissu neural comme explants prosencéphale. Les méthodes sont donnés pour l'utilisation de deux Affi-Gel perles et perles acrylique héparine.

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