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dissection de disques imaginaux de la 3ème instar larves de drosophile

Dissection of Imaginal Discs from 3rd Instar Drosophila Larvae

Ce protocole illustre la technique de dissection utilisé pour isoler disques imaginaux de larves de drosophile à la 3ème étape larvaire. Méthodes pour la fixation des tissus après avoir dit et la suppression de l&#39;aile, des jambes, des yeux et des disques sont démontrées directement sur une lame de microscope pour la visualisation ultérieure.

Dissection de disques imaginaux de la 3ème Instar larves de drosophile

Aujourd'hui, je vais vous montrer comment disséquer les disques imaginaux de larves de drosophile de troisième stade larvaire. Les disques de larves de troisième stade peuvent être utilisés pour étudier divers processus du développement. Dans notre laboratoire, nous les utilisons pour observer le processus d'apoptose, mais vous pouvez également y exprimer différentes protéines et les étudier de cette manière afin d'observer une grande variété de processus développementaux se déroulant dans les disques.Pour ce faire, j'utiliserai plusieurs outils très importants. Le premier est le bâtonnet de prélèvement avec lequel nous sortirons les larves de leurs boîtes. Ensuite, et c'est très important, la pince de dissection, qui doit être extrêmement fine afin que la dissection puisse être réalisée correctement.Ensuite, nous utiliserons une lame chirurgicale, une lame chirurgicale n°11, pour retirer les disques de la tête. Puis nous placerons les disques sur une lame porteuse avec du vector shield comme milieu de montage. La première étape consiste donc à collecter des larves troisièmes stades errantes, troisièmes stades et étoilées.J'utilise simplement mon bâtonnet de prélèvement pour les détacher délicatement de la paroi du flacon. Parfois, il est utile que le bâtonnet soit légèrement humide, puis on les place dans une goutte de PBS. Très bien, nous avons ici nos larves au stade trochalier.Étant droitier, je vais tourner sa tête vers ma droite et nous allons utiliser quelques repères anatomiques pour nous guider quant à l'endroit où le saisir. Le premier est la partie principale de la trachée ici et ici. Ensuite, il y a une petite section transversale ici, vers la tête.Tout d'abord, je vais saisir doucement la larve à environ deux tiers de la longueur du corps à partir de la tête. Ensuite, je vais saisir avec ma main droite quelques millimètres derrière la pièce transversale ici, en essayant d'atteindre environ la moitié de la largeur de la larve. C'est une prise assez bonne.Vous pouvez voir que j'ai environ atteint la moitié du processus. Ensuite, je tire doucement vers l'avant avec ma main droite, en observant tous les intestins qui sortent. Très bien. La partie principale du corps peut maintenant être mise de côté.Et voici la tête, qui comprend les disques imaginaux attachés aux pièces buccales. Je vais donc le saisir par les pièces buccales afin de ne pas écraser les disques, puis le déplacer vers une nouvelle goutte de PBS. Nous avons maintenant notre tête de larve fixée.Nous allons retirer tous les tissus excédentaires et soit saisir la larve par les pièces buccales comme précédemment, soit la maintenir contre la plaque de dissection avec la pince. Les pièces buccales se trouvent maintenant à gauche. Très bien, voici l'intestin, que nous ne voulons pas, et voici une glande salivaire.Il y a un peu de corps adipeux ou du corps adipeux. Continuez simplement à l'écarter, en particulier la graisse, qui peut interférer avec certains dosages et colorations de ce que vous ne souhaitez pas. Nous avons donc maintenant la tête de larve nettoyée.Nous disposons maintenant de nos têtes de larves, qui ont été disséquées en les séparant du corps, fixées et lavées, les tissus superflus ayant été retirés, et elles ont été traitées avec les réactifs nécessaires, qui peuvent être une coloration immunohistochimique dans C two tunnel ou une autre coloration fonctionnelle. Nous les avons ensuite placées sur une lame et nous sommes prêts à disséquer les disques réels en les séparant de la tête, ainsi que les pièces buccales.Ok, cette fois-ci nos pièces buccales se trouvent à gauche ici. Je vais prendre ma pince et simplement les appuyer contre la lame. De ma main droite, j'ai une lame de scalpel n°11, un instrument un peu plus fin, que j'utiliserai pour la dissection.Tout d'abord, je vais retirer le SNC et les lobes optiques. Vous voyez ici le SNC, les deux lobes optiques, et voici les disques oculo-antennaires qui y sont attachés. Donc, si je retire le SNC en insérant ma lame entre les lobes optiques et les disques oculaires, puis en tirant lentement, les disques oculaires s'étirent progressivement.Très bien, nous avons donc le SNC et les lobes optiques. Maintenant, nous avons les deux disques oculaires, qui ont été détachés du SNC. Je vais maintenant les séparer des pièces buccales en coupant et en tirant délicatement à la base.D'accord, donc il y a un disque oculo-antennaire, l'autre disque oculo-intenal. D'accord. Et maintenant, nous pouvons voir le disque wing qui dépasse ici. Je vais, encore une fois, délicatement trouver la coupe basale et tirer.Voilà donc un disque wing et un disque leg attaché à celui-ci, accompagnés d’un petit fragment de trachée. Bon, voici votre disque wing avec un disque leg attaché, et on voit évidemment plusieurs disques leg. Nous pouvons donc explorer un peu ici et trouver d’autres disques en sondant délicatement avec la lame.Voilà tous les disques que nous allons trouver ici. Il y a encore quelques disques de pattes.

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University of California, Irvine (UCI).  Ce protocole illustre la technique de dissection utilisé pour isoler disques imaginaux de larves de drosophile à la 3ème étape larvaire. Méthodes pour la fixation des tissus après avoir dit et la suppression de l'aile, des jambes, des yeux et des disques sont démontrées directement sur une lame de microscope pour la visualisation ultérieure.

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