Hémocytes drosophile se dispersent sur l'ensemble de l'embryon en développement. Ce protocole démontre comment monter et à l'image de ces migrations à partir d'embryons avec les hémocytes marqués par fluorescence.
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Article de méthode
En direct de l'imagerie Drosophila melanogaster Migrations hémocytaires embryonnaires
Dans cet article
Résumé
Résumé
Beaucoup de migration cellulaire des études utilisant l'adresse
Protocole
Préparation
- Obtenir appropriés lignes drosophile contenant une hémocytes spécifiques Gal4 conducteur (p. ex srp-Gal4 2) et un journaliste codées génétiquement fluorescent sous SAMU de contrôle (par exemple, UAS-GFP). Les mouches homozygotes pour srp-Gal4, UAS-GMA 3 ou CRQ-Gal4, UAS-GFP 4, 5 sont particulièrement utiles à des fins d'imagerie (nb GMA est la GFP fusionnée au domaine de liaison de l'actine-moésine); voir ci-dessous pour une discussion sur la gamme de Gal4 pilotes et UAS constructions disponibles (le stock Bloomington centre contient une grande variété).
- Typ....
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Discussion
Les éléments les plus importants de cette procédure sont à la sélection d'embryons sains avec hémocytes clairement étiquetés et de les monter avec soin sans les endommager. Une fois que les embryons sont des halocarbures dans l'huile ils sont résistants à la déshydratation et une fois montée peut être imagée pendant plusieurs heures. Dans nos mains, nous pouvons hémocytes d'image pendant trois heures, avec une déshydratation négligeable de l'embryon ou du photo-dommages évidents, en prenant un z-pile d&#.......
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Remerciements
Ce protocole a été développé par notre travail au sein et en collaboration avec les laboratoires de Paul Martin et Antonio Jacinto. Nous remercions le Centre Stock Bloomington pour son excellent service et la communauté drosophile de continuer à partager les lignes voler. BS est actuellement financé par une subvention du BBSRC projet. WW est financé par une bourse du Wellcome Trust en développement de carrière.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Filtre cellulaire | BD Biosciences | 352350 | 70μm de pores |
| Huile Halocarbon 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | |
| Boîte Lumox/Petriperm | Sarstedt Ltd | 96077305 |
Références
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Bruckner, K. The PDGF/VEGF receptor controls blood cell survival in Drosophila. Dev Cell.
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Réimpressions et autorisations
