Cette technique permet l'utilisation de l'angle magique à haute résolution filer spectroscopie par résonance magnétique protonique (HRMAS 1H-MRS) pour la caractérisation moléculaire de vivre Drosophila melanogaster Avec un spectromètre de 14,1 teslas conventionnelle équipée d'une sonde HRMAS.
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Article de méthode
Spectroscopie par résonance magnétique du direct Drosophila melanogaster En utilisant Magic Angle Spinning
Dans cet article
Résumé
Résumé
High-Resolution Magic Angle Spinning (HRMAS) protons spectroscopie par résonance magnétique (
Protocole
Partie 1: Préparation de la drosophile pour les mesures de HRMAS
- Utilisation de la norme flylab procédures 1, collecter nouvellement eclosing mouches pendant 3 jours et de les transférer à voler la nourriture volée flacons contenant frais. Incuber les mouches recueillies pendant 5 jours afin que les mouches deviennent 5-8 jours anciens, juste avant l'expérience. Un seul sexe (généralement des hommes) est utilisé pour des expériences.
- Utilisez saine, intacte mouches de type sauvage à comparer avec traitées par exemple traumatisés ou mouches génétiquement modifiées 1.
- Placez mouches simples dans des tubes 2m....
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Discussion
À l'exception du récent rapport de la faisabilité de l'IRM in vivo dans les mouches des fruits 6, études in vivo chez la drosophile MRS n'ont pas encore été signalés. Dans le présent protocole, nous décrivons la mise en œuvre d'un roman in vivo HRMAS 1 H-MRS approche pour la détection de molécules biologiquement importantes. Plus précisément, nous avons détecté des lipides et des métabolites de petites mouches drosophiles en dire.......
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Déclarations de divulgation
Expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec les directives et les règlements stipulés par le Massachusetts General Hospital Animal Research Comité Institutional Review Board.
Remerciements
Ce travail a été soutenu en partie par un National Institutes of Health (NIH) aux subventions AI063433 Laurence G. Rahme, un des Instituts Institut national de la santé (NIH) Centre Grant (P50GM021700) à Ronald G. Tompkins (A. Aria Tzika, directeur de le cœur RMN), et l'Hôpital des Shriners pour enfants de subvention de recherche (# 8893) à A. Aria Tzika. Nous remercions Dionyssios Mintzopoulos Ph.D. pour l'assistance dans les phases initiales du développement de ce protocole et Ovidiu C. Andronesi Ph.D. pour l'assistance à la séquence d'impulsions TOBSY.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires | |
|---|---|---|---|---|
| Oxyde de deutérium | Réactif | Sigma-Aldrich | 7789-20-0 | |
| 3-(triméthylsilyl)propionique-2,2,3,3-d4 acide | Réactif | Sigma-Aldrich | 24493-21-8 | |
| agar, saccharose, levure, farine de maïs | Alimentation | Genesee Scientific | http://www.flystuff.com/ | |
| Mouches Oregon RS ou Canton-S | Lignées de drosophiles adultes | Centre de ressources de Bloomington | http://flystocks.bio.indiana.edu/ | |
| Pinceau | Équipement | (taille 0) | ||
| Tubes de 2 ml | Équipement | Fisher Scientific | K749521-1590 | |
| Incubateurs pour drosophiles | Équipement | capacité d'humidité élevée (60-75 %), température réglable et cycle lumière : obscurité de 12 h : 12 h. | ||
| Spectromètre RMN Bruker Bio-Spin Avance (600,13 MHz) 4 mm à triple résonance (1H, 13C, 2H) Sonde HRMAS | Équipement | Bruker Corporation | ||
| Unité BTO-2000 combinée à une unité pneumatique MAS | Équipement | Bruker Corporation | ||
| rotor en oxyde de zirconium de 4 mm (capacité 50 µl) | Équipement | Bruker Corporation | B3829 (magasin Bruker) | |
| MestReC (Mestrelab Research) | Logiciel | Analyse des spectres RMN 1D http://mestrelab.com/ | ||
| SPARKY 3, USCF | Logiciel | Analyse de spectres RMN 2D http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/ |
Références
- Apidianakis, Y., Rahme, L. G. Drosophila melanogaster as a model host for studying Pseudomonas aeruginosa infection. Nat Protoc. 4, 1285-1294 (2009).
- Meiboom, S., Gill, D. Modified spin-echo method for measuring nuclear relaxation time. Rev Sci Instrum. <....
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Réimpressions et autorisations
