Isolement de cellules humaines endotheliales de veine ombilicale (HUVEC)

Résumé

Ce protocole vidéo illustre l'isolement et la culture de cellules humaines endothéliales de veine ombilicale (HUVEC) de cordon ombilical humain. Une fois isolé ces cellules peuvent être utilisées pour des dosages angiogenèse in vitro comme le dosage optimisé fibrine billes de gel a également démontré par le laboratoire de M. Hughes.

Résumé

L'angiogenèse est un complexe multi-étapes, où, en réponse à des stimuli angiogéniques, les nouveaux navires sont créés à partir de la vascularisation existante. Ces étapes comprennent: la dégradation de la membrane basale, la prolifération et la migration (germination) des cellules endothéliales (CE) dans la matrice extracellulaire, l'alignement de la CE en cordons, la formation de lumière, anastomose, et la formation d'une nouvelle membrane basale. Beaucoup d'essais in vitro ont été développées pour étudier ce processus, mais la plupart ne reproduisent certaines étapes de l'angiogenèse, et morphologiquement les vaisseaux souvent ne ressemblent pas à des navires in vivo. Ici nous démontrons une optimisation dans le dosage angiogenèse in vitro qui utilise la veine ombilicale humaine CE et les fibroblastes. Ce modèle reprend toutes les étapes clés au début de l'angiogenèse, et surtout les vaisseaux d'affichage lumens brevets intercellulaire entouré par polarisée CE. Les navires peuvent être facilement observées en contraste de phase et de time-lapse microscopie, et récupéré à l'état pur pour des applications en aval.

Protocole

Procédure

1. Lay cordon sur le pavé propre et tamponnez hors excès de sang. Faire des coupes fraîches sur les deux extrémités de la corde.
2. Insérez 21 1 / 2 G aiguille avec la gaine en plastique sur l'aiguille, dans la veine. (La veine est la plus grande ouverture, les deux plus petits sont des artères)
3. Clamp l'aiguille en place avec une pince hémostatique et de fixer la seringue 20cc de Hanks à l'aiguille.
4. Poussez le Hanks dans la veine avec une pression modérée. Collecter les déchets dans le bécher avec l'eau de Javel. (Holding de l'aiguille et le cordon d'....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Collagénase à 0,1 %			10 mL par cordon, préchauffé à 37 °C
Flacons de culture tissulaire			T75, un par cordon.
Milieu de Hanks
ciseaux			stériles
bécher			stérile
tubes de 50 mL