Préparation des oligomères β-amyloïde 1-42 Et induction de la plasticité synaptique Dépréciation sur les coupes d'hippocampe

Résumé

Une caractéristique de la maladie d'Alzheimer est l'élévation de Aß _1-42 Peptide. Ici nous fournissons un protocole pour la préparation de Aß synthétique _1-42 Oligomères, ce qui altère l'hippocampe potentialisation à long terme, une corrélation cellulaires de la mémoire. Cette procédure est utile pour étudier les mécanismes de Aß induite par le dépistage de pathologie et de drogue.

Résumé

Dépréciation des connexions synaptiques est susceptible de sous-tendent les changements subtils amnésique survenant dès les premiers stades de la maladie d'Alzheimer (MA). β-amyloïde (Aß), un peptide produit en grandes quantités dans la MA, est connue pour réduire potentialisation à long terme (LTP), un téléphone cellulaire corrélat de l'apprentissage et la mémoire. En effet, la dépréciation causée par Aßi LTP est un paradigme expérimental utile pour l'étude des dysfonctionnements synaptiques dans les modèles AD et pour le dépistage des drogues capables d'atténuer ou de revenir de telles déficiences synaptiques. Des études ont montré que Aßi produit la perturbation LTP préférentiellement via sa forme oligomérique. Ici, nous fournir un protocole détaillé pour la LTP compromettre par une perfusion de oligomérisés synthétiques Aβ1-42 peptide sur aigus coupes d'hippocampe. Dans cette vidéo, nous présentons une procédure étape par étape pour la préparation des oligomères Aßi

Protocole

Remise en suspension de β-amyloïde peptide

Avant de commencer avoir en main:

• Aßi _1-42 (poudre lyophilisée)
• 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (HFIP)
• Basse-contraignante microtubes polypropylène (1,5 ml)
• Étanche seringue Hamilton avec arrêt plongent Téflon (250 pi)
• Diméthylsulfoxyde (DMSO)

1. Autoriser Aßi lyophilisé _1-42 s'équilibrer à température ambiante pendant 30 minutes pour éviter la condensation à l'ouverture du flacon peptide.
2. Sous la hotte, rétablir la suspension Aßi _1-42 peptide dans HFIP glacée pour obtenir une s....

Discussion

Comme décrit ci-dessus, plusieurs problèmes dans la préparation de Aßi oligomérique peut entraîner la LTP intacte. Une façon d'évaluer si la dégradation de l'Aß ou le manque d'oligomérisation Aßi a pu se produire est d'évaluer la préparation à l'aide Aßi TRIS-Tricine PAGE / Western blotting et l'analyse ultracentrifugation analytique (non décrite dans ce protocole). Lorsque occidentale échantillons Blotting sont préparés dans des conditions non-denaturing/non-reducing, une préparation réussie dev.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Aβ 1-42 (lyophilisé)	American Peptide	62-0-80
1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-propanol (HFIP)	Fluka	52517
Diméthylsulfoxyde (DMSO)	Biotium, Inc.	90082
Tubes à centrifuger en polypropylène de 50 mL	Corning	05-538-67
Microtubes MaxyClear de 1,5 ml à récupération maximale	Axygen Scientific	MCT-150-L-C
Solution saline tamponnée au phosphate, pH 7,4	Invitrogen	10010-023
Seringues GASTIGHT de 250 μL	Hamilton Co	1725
Bain ultrasonique	Branson	3510
Système de concentration Savant SpeedVac	Plusieurs	SC 110A