Fissuration par congélation des nématodes : une méthode pour exposer les tissus intérieurs des vers pour la coloration

Résumé

Source : Zhang, N., et al. L’intestin de C. elegans comme modèle de morphogenèse intercellulaire de la lumière et de biogenèse membranaire polarisée in vivo au niveau de la cellule unique : marquage par coloration des anticorps, analyse de perte de fonction de l’ARNi et imagerie. J. Vis. Exp. (2017).

Cette vidéo décrit le fissurage par congélation, une méthode permettant de rendre les tissus de C. elegans accessibles pour la coloration des anticorps en perturbant la cuticule.

Protocole

Ce protocole est un extrait de Zhang et al, L’intestin de C. elegans comme modèle de morphogenèse de la lumière intercellulaire et de biogenèse de la membrane polarisée in vivo au niveau de la cellule unique : marquage par coloration des anticorps, analyse de la perte de fonction de l’ARNi et imagerie, J. Vis. Exp. (2017).

Coloration par anticorps de l’intestin de C. elegans

1. fixation
   1. Prenez une lame de verre propre et utilisez de la poly-L-lysine pour générer une fine pellicule sur laquelle les vers peuvent coller. Placez 30 μL de ....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Coloration des anticorps
poly-L-lysine	sigma	Réf. P5899
Méthanol	Fisher Scientific	Réf. A452-4
Acétone	Fisher Scientific	A949SK-4
Permount	Fisher Scientific	SP15-100
Lames de microscope	Fisher Scientific	4448
lamelles de microscope (22x22-1)	Fisher Scientific	12-542-B
M9 Moyen			Fabriqué en laboratoire
OP50 bactéries	La