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Ce protocole est un extrait de Possik et Pause, Mesure de la résistance au stress oxydatif de Caenorhabditis elegans dans des plaques de microtitration à 96 puits, J. Vis. Exp.(2015).
1. Réalisation du test de résistance au stress oxydatif
- Pipette 40 μl de la solution PQ de 100 mM (préparée fraîche) dans chaque puits d’une plaque de 96 puits. Utilisez au moins 12 puits comme répliques de chaque condition (traitement, mutant, etc.). À l’aide d’un pic à ver fil-de-platine, transférez 5 à 8 larves d’animaux L4 dans chaque puits en indiquant l’heure de début et l’heure de fin.
- Lorsque vous démarrez une autre condition, notez l’heure de début et l’heure de fin. Placez la plaque à 20 °C pendant le temps d’incubation entre le transfert des vers et le marquage des animaux morts une heure plus tard à partir de l’heure de départ.
- À l’aide du microscope de dissection, comptez la survie toutes les heures. Secouez doucement la plaque avant de commencer à compter. Indiquez que les vers qui ne bougent pas, même après avoir repéré une lumière de haute intensité, sont des animaux morts. Indiquez également le nombre d’animaux vivants.
REMARQUE : En regardant la forme des vers, la queue et le mouvement de la tête à fort grossissement, il est possible de déterminer les vers morts vivants.
- Répétez cette étape toutes les heures jusqu’à ce que la plupart des vers soient morts.
2. Détermination du pourcentage de survie à chaque point temporel
- Calculez le nombre total d’animaux par condition en additionnant le nombre total d’animaux transférés dans chaque puits. Ignorez les animaux qui sont endommagés ou tués lors du transfert.
- Pour chaque point temporel, calculez le nombre total d’animaux morts par condition (somme des animaux morts dans les 12 puits). Pour chaque point temporel, calculez le pourcentage de mort (nombre d’animaux morts divisé par le nombre total d’animaux et multiplié par 100) et le pourcentage de survie (100 moins pourcentage de mortalité).
- Répétez ce test au moins 3 fois indépendamment.