Ce protocole est un extrait de Possik et Pause, <a href="https://www.jove.com/video/2496/measuring-caenorhabditis-elegans-life-span-96-well-microtiter">Mesure de la résistance au stress oxydatif de Caenorhabditis elegans dans des plaques de microtitration à 96 puits</a>, J. Vis. Exp.(2015).
1. Réalisation du test de résistance au stress oxydatif
<ol>
	<li>Pipette 40 μl de la solution PQ de 100 mM (préparée fraîche) dans chaque puits d’une plaque de 96 puits. Utilisez au moins 12 puits comme répliques de chaque condition (traitement, mutant, etc.). À l’aide d’un pic à ver fil-de-platine, transférez 5 à 8 larves d’animaux L4 dans chaque puits en indiquant l’heure de début et l’heure de fin.</li>
	<li>Lorsque vous démarrez une autre condition, notez l’heure de début et l’heure de fin. Placez la plaque à 20 °C pendant le temps d’incubation entre le transfert des vers et le marquage des animaux morts une heure plus tard à partir de l’heure de départ.</li>
	<li>À l’aide du microscope de dissection, comptez la survie toutes les heures. Secouez doucement la plaque avant de commencer à compter. Indiquez que les vers qui ne bougent pas, même après avoir repéré une lumière de haute intensité, sont des animaux morts. Indiquez également le nombre d’animaux vivants. 
	REMARQUE : En regardant la forme des vers, la queue et le mouvement de la tête à fort grossissement, il est possible de déterminer les vers morts vivants.</li>
	<li>Répétez cette étape toutes les heures jusqu’à ce que la plupart des vers soient morts.</li>
</ol>
2. Détermination du pourcentage de survie à chaque point temporel
<ol>
	<li>Calculez le nombre total d’animaux par condition en additionnant le nombre total d’animaux transférés dans chaque puits. Ignorez les animaux qui sont endommagés ou tués lors du transfert.</li>
	<li>Pour chaque point temporel, calculez le nombre total d’animaux morts par condition (somme des animaux morts dans les 12 puits). Pour chaque point temporel, calculez le pourcentage de mort (nombre d’animaux morts divisé par le nombre total d’animaux et multiplié par 100) et le pourcentage de survie (100 moins pourcentage de mortalité).</li>
	<li>Répétez ce test au moins 3 fois indépendamment.</li>
</ol>

<table border="1 » fo :keep-together.within-page="1 » fo :keep-with-next.within-page="toujours">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Microscope stéréo zeiss Discovery v8</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plaque de microtitration 96 bien claire</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

c. elegans essai de survie : un essai de toxicité à court terme

C. elegans Survival Assay: A Short-Term Toxicity Test

Source : Possik, E. et Pause, A. <a href="https://www.jove.com/video/2496/measuring-caenorhabditis-elegans-life-span-96-well-microtiter">Mesure de la résistance au stress oxydatif de Caenorhabditis elegans dans des plaques de microtitration à 96 puits.</a>J. Vis. Exp. (2015).
Cette vidéo présente un test de survie à court terme qui teste un traitement pour la toxicité aiguë ou teste une souche génétique pour la résistance à une condition toxique. L’exemple de protocole montre un exemple de test de survie dans lequel les vers sont testés pour leur capacité à résister au stress oxydatif induit par le paraquat (PQ).

C. elegans Essai de survie : un essai de toxicité à court terme

Source : Possik, E. et Pause, A. Mesure de la résistance au stress oxydatif de Caenorhabditis elegans dans des plaques de microtitration à 96 puits. J. Vis. Exp. ...

- Commencez par préparer le composé à tester pour la toxicité et distribuez-le dans les puits d’une plaque de test. Transférez les vers du stade de développement approprié dans chaque puits et démarrez immédiatement une minuterie. Notez tous les vers endommagés et ne les incluez pas dans vos calculs de survie. Après un temps prédéterminé, comptez le nombre de vers encore vivants dans chaque puits. La lumière vive d’un microscope de dissection ou un léger tapotement sur la plaque devrait faire bouger les vers vivants. Répétez cette observation après chaque intervalle de temps, jusqu’à ce que la plupart des animaux soient morts. Dans le protocole suivant, nous observerons le temps de survie des larves L4 lors de l’exposition au paraquat, un composé qui induit un stress oxydatif. - Dans cette démonstration, le stress oxydatif sera induit à l’aide de paraquat. Préparez une solution fraîche de paraquat de 100 millimolaires comme décrit dans le texte du protocole d’accompagnement. Le paraquat est un composé dangereux et hautement toxique qui doit être manipulé conformément aux directives appropriées. Pipette 40 microlitres de la solution de paraquat à chaque puits d’une plaque de 96 puits. Utilisez au moins 12 puits comme répliques de chaque condition testée. À l’aide d’un pic à ver métallique de platine, transférez cinq à huit larves d’animaux L4 dans chaque puits. Indiquez l’heure de début et l’heure de fin pour chaque condition testée. Placez la plaque à 96 puits à 20 degrés Celsius. Une heure après l’heure de départ, notez les animaux morts et vivants à l’aide d’un microscope à dissection. Secouez doucement l’assiette avant de commencer à compter. Les vers qui ne bougent pas même après avoir repéré une lumière de haute intensité sont considérés comme morts. Observez la forme des vers, la queue et le mouvement de la tête à fort grossissement pour distinguer les vers morts des vers vivants. Évaluez la survie toutes les heures jusqu’à ce que la plupart des vers soient morts, et répétez ce test au moins trois fois indépendamment. Pour déterminer le pourcentage de survie pour chaque point temporel, calculez d’abord le nombre total d’animaux par condition en additionnant le nombre total d’animaux transférés dans chaque puits. Ignorez les animaux qui ont été endommagés ou tués lors du transfert. Ensuite, pour chaque point temporel, calculez le nombre total d’animaux morts par condition. Calculez le pourcentage de décès et le pourcentage de survie.

c-elegans-survival-assay-a-short-term-toxicity-test

Research

Recherche

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biology

Biologie

Caenorhabditis elegans (worm)

Caenorhabditis elegans (ver)

Anatomy and Physiology

Anatomie et physiologie

3.7K vues. - Commencez par préparer le composé à tester pour la toxicité et distribuez-le dans les puits d’une plaque de test. Transférez les vers du stade de développement approprié dans chaque puits et démarrez immédiatement une minuterie. Notez tous les vers endommagés et ne les incluez pas dans vos calculs de survie. Après un temps prédéterminé, comptez le nombre de vers encore vivants dans chaque puits. La lumière vive d’un microscope de dissection ou un léger tapotement ...

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Microscope stéréo zeiss Discovery v8	Zeiss
Plaque de microtitration 96 bien claire

C. elegans Essai de survie : un essai de toxicité à court terme

Dans cet article

Résumé

Protocole

Matériaux

Réimpressions et autorisations

Mots-clés

Articles connexes