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Ce protocole est un extrait de Tong et al, Électrotaxie basée sur la microfluidique pour l'analyse quantitative à la demande de la locomotion de Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2013).
1. Expérience d’électrotaxie
- Placez le microcanal sur la platine (de préférence mobile XY) d’un microscope avec une caméra montée connectée à un moniteur (Figure 1).
- Connectez les fils de sortie de l'alimentation ou de l'amplificateur aux électrodes du microcanal. Une simple alimentation en courant continu est suffisante si seul un signal continu est souhaité, mais un amplificateur connecté à un générateur de fonctions permet également l’application de signaux continus et alternatifs pulsés.
- Fixez le tube de sortie du microcanal à une seringue jetable. Immergez l’embouchure du tube d’entrée dans le tampon physiologique M9 et aspirez doucement le liquide dans le canal en appliquant une pression négative à l’intérieur de la seringue (manuellement ou à l’aide d’un pousse-seringue). Lorsque les tubes d’entrée et de sortie sont tous deux remplis de M9, débranchez la seringue du tube. Nivelez les deux tubes à la même hauteur pour éviter l’écoulement hydrostatique.
- Appliquez une tension continue à la voie et assurez-vous que la résistance (R = V/I) est d’environ 0,6 MΩ (pour un microcanal de 50 mm de long, 0,3 mm de large et ~0,1 mm de profondeur).
- Si vous êtes satisfait de l'intégrité du canal, suivez les étapes ci-dessus pour charger les vers d'une suspension diluée dans le canal.
- Débranchez la seringue et manipulez hydrostatiquement le débit en ajustant la hauteur relative des tubes. Utilisez cette méthode pour placer un ver au centre du canal, puis posez les deux tubes à plat à la même élévation.
- Réglez l’alimentation sur la tension appropriée : 4-12 V/cm pour les animaux de stade L3, 4-10 V/cm pour les L4 et 2-4 V/cm pour les jeunes adultes. Activez le signal électrique et laissez 1 min de pré-exposition pour que le ver s’acclimate au champ. La vis sans fin doit commencer à se déplacer vers la cathode. Une fois la minute écoulée, utilisez l’appareil photo pour commencer l’enregistrement.
- Pour les expériences en courant alternatif et en courant continu pulsé, le champ électrique réactif maximal peut être adopté par le haut et la fréquence et le rapport cyclique du signal peuvent être modulés à volonté.
- Une fois l’expérience terminée, retirez tout le liquide (et les vers) du canal, rincez-le avec du dH20 et laissez l’appareil sécher sur une plaque chauffante à 125 °C.
- Extrayez manuellement les données locomotrices des vidéos enregistrées à l’aide de NIH ImageJ (http://rsbweb.nih.gov/ij/) ou d’un logiciel de traçage de vers personnalisé basé sur MATLAB.
