Évaluation du rôle de l’immunité de l’hôte dans l’infection mycobactérienne à l’aide d’un modèle de poisson-zèbre

Résumé

Source : Luukinen, H., et al. Modéliser la tuberculose chez le poisson-zèbre adulte infecté par Mycobacterium marinum . J. Vis. Exp. (2018).

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité local de soins aux animaux institutionnels et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Infection expérimentale à M. marinum avec injection intrapéritonéale

1. Pipettez une gouttelette de 5 μL de la solution bactérienne diluée sur un morceau de film parafilm et tirez la gouttelette dans une aiguille d’insuline de 30 G.
2. Utilisez des poissons sauvages âgés de 5 à 8 mois et des poissons mutants rag1−/−hu1999 pour l’expérience. Anesthésiez le poisson-zèbre adulte dans l’eau de l’aquarium avec 0,02 % d’ester éthylique d’acide 3-aminobenzoïque (pH 7,0). Placez le poisson côté ventral vers le haut en une fente sur un plastique mousseux humide.
   REMARQUE : Les poissons mutants rag-/- ne peuvent pas subir la recombinaison somatique ni produire des cellules T et B fonctionnelles.
3. Injectez l’aiguille entre les nageoires pelviennes à un angle d’environ 45°. Gardez l’aiguille ouverte vers le haut pour observer que toute l’ouverture est à l’intérieur de la cavité abdominale. Injectez lentement la suspension bactérienne et retirez soigneusement l’aiguille.
   REMARQUE : Si le traceur rouge s’échappe du poisson lors de l’injection, excluez le poisson de l’expérience.
4. Immédiatement après l’injection, transférez les poissons dans un aquarium de récupération avec de l’eau fraîche.
5. Prélever des échantillons de la suspension bactérienne sur des plaques 7H10 toutes les 15 minutes à partir de l’aliquote bactérienne en usage, incuber la bactérie à 29 °C pendant 5 jours et vérifier la dose d’infection en comptant les colonies sur les plaques.
6. Vérifiez régulièrement le bien-être des poissons et euthanasiez tout poisson présentant des symptômes d’infection ayant une concentration supérieure à 0,02 % d’ester éthylique de l’acide 3-aminobenzoïque (pH 7,0).
   REMARQUE : Environ 7 % des poissons-zèbres adultes infectés par 34 ± 15 CFU et 30 % des poissons-zèbres infectés par 2029 ± 709 CFU auront eu des symptômes à 8 semaines19. Les symptômes peuvent inclure une nage anormale, un manque de réponse au toucher, des halètements, un œdème ou une dégradation visible.
7. Maintenir le poisson-zèbre selon les normes communes

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Mycobacterium marinum	Collection de la culture de type américain	ATCC 927
Agar Middlebrock 7H10	BD, Thermo Fisher Scientific	11799042
Enrichissement OADC de Middlebrock	BD, Thermo Fisher Scientific	11718173
Middlebrock 7H9 moyen	BD, Thermo Fisher Scientific	11753473
Enrichissement ADC de Middlebrock	BD, Thermo Fisher Scientific	11718173
Comprimés de solution saline tamponnée au phosphate (PBS)	Sigma-Aldrich	P4417-50TAB
Rouge phénol	Sigma-Aldrich	P3532
Aiguille 27 G	Henke Sass Loup	4710004020
Seringue de 1 mL	Henke Sass Loup	4010.200V0
Aiguille d’insuline Omnican 100 30 G	Braun	9151133
Ester éthylique de l’acide 3-aminobenzoïque (pH 7,0)	Sigma-Aldrich	A5040