Un test in vitro pour étudier les interactions microbiennes en co-culture

Résumé

Source : Temkin, M. I. et al. Tests de co-culture à haut débit pour l’étude des interactions microbiennes. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo montre un test in vitro visant à étudier les interactions microbiennes entre Corynebacterium propinquum et Staphylococcus en coculture.

Protocole

1. Inoculation par organisme cible

REMARQUE : Après une incubation nocturne, assurez-vous que les cultures sont troubles. Certaines cultures bactériennes peuvent se floculer au fond du tube de culture. Manipulez les tubes de culture pour disperser les amas et évaluer la turbidité de la culture.

1. Préparez la plaque cible en remplissant chaque puits d’une plaque vide à 12 puits avec 1,8 mL de bouillon Brain-heart-infusion (BHI) et 200 μL de la culture ciblée pendant la nuit.
   REMARQUE : Un organisme cible désigne l’organisme dont le statut d’inhibition est déterminé à l’aide du test d’interaction de coculture. Pour cette expérience, les organismes ciblés sont des spp. de Staphylococcus isolées à partir d’échantillons de lavages nasaux humains.
2. Déballez et placez un tampon d’inoculation stérile dans la plaque ciblée. Faites doucement tourner les cultures dans les puits, en veillant à ce qu’elles ne contaminent pas les puits voisins.
3. Soulevez le tampon d’inoculation et assurez-vous qu’il y ait une gouttelette de culture ciblée diluée sur chaque pointe du tampon.
4. Préparez une plaque de contrôle en monoculture en plaçant le tampon d’inoculation sur une plaque de biotest non inoculée et en balancez doucement le tampon afin qu’une goutte de culture inocule chaque puits. Une fois le tampon d’inoculation retiré, une gouttelette de culture doit être visible dans les puits de la plaque de bioanalyse.
   1. Si aucun puits n’est inoculé avec le tampon d’inoculation en raison de niveaux inégaux de substrat, on localise 3 μL de culture diluée pendant la nuit sur le côté droit des puits à l’aide d’une pipette.
5. Inoculez les plaques de biotest comme fait ci-dessus (voir l’étape 1.4.1), mais alignez le tampon de façon à ce que les extrémités s’alignent avec le côté droit de la plaque à 12 puits. Assurez-vous que le tampon ne touche pas la colonie bactérienne existante lors de l’inoculation des puits.
6. Retirez soigneusement le tampon et replacez-le dans la plaque cible.
7. Répétez l’inoculation pour chaque plaque de biotest jusqu’à ce que toutes les plaques soient inoculées.
8. Incubez les plaques de biotest à l’envers à la température appropriée pendant 7 jours.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Plaque de culture cellulaire à 12 puits, stérile avec couvercle	Bio-One de Greiner	665 180
Agar, bactériologique	VWR	J637
Bouillon d’infusion cerveau-cœur	Dot Scientific	DSB11000-5000