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Le rôle du microenvironnement cellulaire est reconnu comme crucial dans la détermination du destin cellulaire et la fonction dans pratiquement tous les tissus des mammifères du développement à la transformation maligne. En particulier, l'interaction avec le stroma voisin a été impliqué dans une multitude de phénomènes biologiques, mais les techniques conventionnelles de limiter la capacité d'interroger les éléments spatiaux et dynamique de ces interactions.
En reconfigurables Culture micromécanique (RC), nous employons un substrat silicium micro-usiné avec des pièces mobiles pour contrôler dynamiquement interactions cellule-cellule par le biais de repositionnement mécanique. Auparavant, cette méthode a été appliquée pour étudier la communication intercellulaire dans les co-cultures d'hépatocytes et des cellules non parenchymateuses, démontrant les interactions dépendant du temps et une gamme limitée d'solubles de signalisation 1.
Ici, nous décrivons en détail la préparation et l'utilisation du système de RC. Nous commençons par la démonstration de la manipulation des pièces périphériques utilisant une pince à épiler, y compris actionnement entre l'écart et les configurations de contact (les populations de cellules séparées par un étroit de 80 um écart, ou en contact direct intime). Ensuite, nous détaillons le processus de préparation des substrats pour la culture, et le processus multi-étapes d'ensemencement de cellules nécessaires pour l'obtention de monocouches de cellules confluentes. En utilisant la microscopie vivons, nous illustrons ensuite en temps réel la manipulation de cellules entre les différentes configurations possibles expérimental. Finalement, nous démontrons les étapes nécessaires afin de régénérer la surface du dispositif de réutilisation: le toluène et le nettoyage de piranha, le revêtement de polystyrène, et le traitement par plasma d'oxygène.