Micro-dissection du cerveau de rat pour l'ARN ou de l'extraction de protéines à partir région spécifique du cerveau

Résumé

Micro-dissection du cerveau de rat dans différentes régions est extrêmement important pour l'étude de différentes maladies neurodégénératives. Cette vidéo montre des micro-dissection des quatre régions du cerveau majeurs comprennent bulbe olfactif, le cortex frontal, le striatum et l'hippocampe dans les tissus de cerveau de rat frais. Conseils utiles pour un retrait rapide des régions respectives afin d'éviter la dégradation de l'ARN et des protéines du tissu sont donnés.

Résumé

Micro-dissection du cerveau de rat dans différentes régions est extrêmement important pour l'étude de différentes maladies neurodégénératives. Cette vidéo montre des micro-dissection des quatre régions du cerveau majeurs comprennent bulbe olfactif, le cortex frontal, le striatum et l'hippocampe dans les tissus de cerveau de rat frais. Conseils utiles pour un retrait rapide des régions respectives afin d'éviter la dégradation de l'ARN et des protéines du tissu sont donnés.

Protocole

Etape 1

Sacrifice du rat selon des protocoles établis. Enlever le cerveau du crâne et de le rincer dans de la glace froide DEPC traitées eau Milli Q pour enlever toute trace de sang de surface.

Etape 2

Placer sur une plaque de métal froid. Couper le cerveau bi-moitié dans l'hémisphère droit et gauche.

Figure 1. Les positions de coupe de la vue médiale de l'hémisphère rat

Étape 3

Recueillir le bulbe olfactif à droite après la première coupe. Flash geler l'échantillon dans l'azote liquide et conserver à -80 ° C.

Figure 2. Dissection bulbe olfactif

Etape 4

Recueillir le droit cortex frontal après la deuxième coupe, en utilisant une lame et une Dumont n ° 5 forceps. Flash geler l'échantillon dans l'azote liquide et conserver à -80 ° C.

Figure 3. Frontale du cortex de dissection

Etape 5

Recueillir le striatum (noyau caudé) juste après la troisième coupe à l'aide de deux pinces No.5 Dumont. Flash geler l'échantillon dans l'azote liquide et conserver à -80 ° C.

Figure 4. Striatum (noyau caudé) la dissection

Etape 6

Pour recueillir l'hippocampe, placez la face ventrale du cerveau et puis retirez du mésencéphale pour exposer l'hippocampe. Disséquer l'hippocampe du cortex en utilisant deux pinces Dumont n ° 5. Flash geler l'échantillon dans l'azote liquide et conserver à -80 ° C.

Figure 5. Dissection Hippocampus

Discussion

Différentes régions du cerveau associée aux différentes maladies neurodégénératives. Par exemple, le cortex frontal et le striatum se rapportent à la maladie de Parkinson alors hippocampe concerne la maladie d'Alzheimer. Précis de micro-dissection du cerveau nous permet de détecter les changements ARNm et la protéine dans la région de malades avec plus de précision.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Microscope	Olympus Corporation
Outils de dissection			Plaque métallique, pinces, lame, etc. Emballés individuellement dans du papier d’aluminium et chauffés à 180 °C pendant huit heures pour éliminer les RNases. Refroidis sur glace avant utilisation.