Article de méthode

Solide plaque à base de restriction alimentaire Caenorhabditis elegans

DOI :

10.3791/2701

⸱

28 mai 2011

 , 
1Department of Internal Medicine, Division of Geriatric Medicine, University of Michigan, 2Department of Molecular and Integrative Physiology, University of Michigan

Dans cet article

Résumé

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Nous présentons ici un protocole pour la réalisation solide plaque de base de la restriction alimentaire au C. elegans Avec des bactéries tuées.

Résumé

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Réduction de la consommation d'aliments sans malnutrition ou de famine est connue pour augmenter la durée de vie et de retarder l'apparition de diverses maladies liées au vieillissement dans une large gamme d'espèces, y compris les mammifères. Elle entraîne également une diminution du poids corporel et de la fertilité, ainsi que des niveaux plus bas de glucose plasmatique, l'insuline et l'IGF-1 chez ces animaux. Ce traitement est souvent désigné comme la restriction alimentaire (DR) ou de la restriction calorique (RC). Le nématode Caenorhabditis elegans est apparu comme un organisme modèle important pour étudier la biologie du vieillissement. Manipulations environnementaux et génétiques ont été utilisées pour modéliser DR et ont montré de prolonger la durée de vie en C. elegans. Cependant, la plupart des études ont rapporté DR en C. elegans ont été réalisées en propageant des animaux dans des milieux liquides, tandis que la plupart des études génétiques dans le domaine du vieillissement ont été réalisés sur la gélose standard de solide dans des boîtes de Pétri. Nous présentons ici un protocole standard de DR à l'aide NGM solides à base de gélose plaque avec des bactéries tuées.

Protocole

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1. Établir une courbe d'étalonnage pour l'estimation des concentrations de bactéries

Cette section décrit une méthode pour l'estimation de la concentration de bactéries pour toute souche donnée de bactéries (par exemple, OP50, HT115) qui sera utilisé comme source de nourriture pour les expériences de restriction alimentaire en C. elegans. Courbes d'étalonnage distincts devraient être établis pour chaque bactérie souche utilisée.

  1. Inoculer une seule colonie de E. coli OP50 bactéries sélectionnées dans une série fraîche de bactéries sur une gélose LB en 3 ml de bouillon LB liquide.
  2. Placer OP50 culture à....

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Discussion

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La restriction alimentaire (DR) est connu pour augmenter la durée de vie et de retarder l'apparition de diverses maladies liées au vieillissement dans une large gamme d'espèces, y compris les mammifères 5-7. Manipulations environnementaux et génétiques ont été utilisées pour modéliser DR en C. elegans, y compris les vers de culture dans un milieu semi-défini de liquide 8,9, la dilution de la source de nourriture des bactéries en milieu liquide 10-12, et l'utilisation.......

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Déclarations de divulgation

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Aucun conflit d'intérêt déclaré.

Remerciements

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Ce travail a été soutenu par une bourse de pilote de Centre de choc Nathan (P30 AG13283) et une subvention R01 (R01 AG028516) du National Institute on Aging (NIA) à A.-LH

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Nom du réactif Société Numéro de catalogue Commentaires
Carbénicilline Duchefa Biochemie C0109.25 Dissous dans l'eau.
Kanamycine Roche 10106801001 Dissous dans l'eau.
Bacto-peptone Becton, Dickinson and Company DF0118072
Bacto-tryptone Becton, Dickinson and Company DF0123075
Bacto-extrait de levure Becton, Dickinson and Company DF0127071
Agar Becton, Dickinson and Company DF00145170
Tube de culture stérile USA Scientific 1485-0810
Spectrophotomètre Amersham Biosciences Gene Quant Pro Amersham fait maintenant partie de GE Healthcare.
Microscope à dissection Zeiss Stemi 2000
Centrifugeuse Beckman Coulter Accuspin FR

Références

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  1. Hsu, A. L., Murphy, C. T., Kenyon, C. Regulation of aging and age-related disease by DAF-16 and heat-shock factor. Science. 300, 1142-1145 (2003).
  2. Kenyon, C., Chang, J., Gensch, E., Rudner, A., Tabtiang, R. A C. elegans mutant that lives twice as long as wild type. Nature. 3....

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Mots-clés

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