$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Cellules dendritiques (CD) peuvent être considérés comme des sentinelles du système immunitaire qui jouent un rôle critique dans son initiation et une réponse à l'infection. Détection de l'antigène pathogènes par les CD naïve est à travers des récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR) qui sont capables de reconnaître des structures spécifiques conservé appelé pathogène motifs moléculaires associés (PAMPS). Détection des PAMPs par les CD déclenche une cascade de signalisation intracellulaire entraîne leur activation et de transformation pour les PED matures. Ce processus est généralement caractérisé par une production d'interféron de type 1 avec d'autres cytokines pro-inflammatoires, la régulation positive des marqueurs de surface cellulaire, comme CMHII et CD86 et la migration des DC matures dans les ganglions lymphatiques drainant, où l'interaction avec les cellules T initie la réponse immunitaire adaptative 2, 3. Ainsi, les PED relier les systèmes immunitaire innée et adaptative.
La capacité à disséquer les réseaux moléculaires qui sous-tendent la réponse à divers pathogènes DC est cruciale pour une meilleure compréhension de la régulation de ces voies de signalisation et de leurs gènes induits. Il devrait également aider à faciliter le développement de vaccins à base de DC contre les maladies infectieuses et les tumeurs. Cependant, cette ligne de recherche a été gravement entravée par la difficulté de transfecter des primaires PED 4.
Méthodes de transduction virus, tels que le système lentiviral, sont généralement utilisés, mais portent de nombreuses limitations telles que la complexité et de la bio-dangereux risque (avec les coûts associés) 5,6,7,8. En outre, la livraison de produits de gènes viraux augmente l'immunogénicité de ces transduites PED 9,10,11,12. L'électroporation a été utilisée avec des résultats mitigés 13,14,15, mais nous sommes les premiers à signaler l'utilisation d'un protocole de transfection à haut débit et de manière concluante démontrer son utilité.
Dans ce rapport, nous résumons un protocole optimisé commerciale pour la transfection à haut débit des humains PED primaire, avec une toxicité cellulaire limitée et une absence de maturation des DC 16. Efficacité de la transfection (de plasmide GFP) et la viabilité des cellules ont été plus de 50% et 70% respectivement. FACS analyse a établi l'absence d'augmentation de l'expression des marqueurs de la maturation du CD86 et CMH II dans des cellules transfectées, tandis qRT-PCR n'a démontré aucune régulation à la hausse des IFNβ. En utilisant ce protocole d'électroporation, nous fournir des preuves pour la transfection réussie des PED avec le siRNA et efficace abattre des gènes ciblés RIG-I, un récepteur de reconnaissance clés virale 16,17, à la fois l'ARNm et de protéine.