Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Préparation préopératoire générale
- Faites jeûner les souris pendant 6 h avant la chirurgie. La nourriture diététique en gel a été administrée 3 jours avant l’opération et exclusivement un jour avant l’opération. Induire l’anesthésie dans une chambre contenant 5 % d’isoflurane (0,4 L/min) et d’O2 (dioxygène ; 0,4 L/min). Effectuez un test de pincement des orteils pour confirmer que l’anesthésie est efficace. Administrer des analgésiques (0,1 mg/kg de buprénorphine), des antibiotiques (10 mg/kg de marbofloxacine) et des procinétiques (1 mg/kg de métoclopramide) par injections sous-cutanées.
- Attribuez une zone de travail spécifique pour les interventions chirurgicales (éloignée de la circulation du laboratoire et des ventilateurs). Nettoyez la zone chirurgicale avec des désinfectants pour surfaces dures dédiés. Placez un coussin chauffant sur la zone de travail pour maintenir l’homéothermie de la souris pendant la chirurgie. Appliquez un sous-tampon propre et absorbant sur le coussin chauffant.
- Rasez l’abdomen du sternum au bassin à l’aide d’un rasoir électrique. Enveloppez l’abdomen de la souris dans une pellicule plastique stérilisée (Figure 1A) et placez la souris en position couchée sur le coussin chauffant.
- Appliquez une pommade vétérinaire sur les yeux pour prévenir la sécheresse sous anesthésie. Placez la souris dans le cône nasal et maintenez l’anesthésie avec de l’isoflurane à 2 % (0,4 L/min) et de l’O2 (0,4 L/min).
- Avant de commencer l’opération, enfilez une blouse d’examen stérile, un bonnet jetable, un masque facial et des gants stériles. Ouvrez un emballage autoclavé contenant un ensemble d’instruments chirurgicaux stérilisés, qui est nécessaire pour toutes les étapes de l’opération. Découpez une vitre dans la pellicule plastique stérilisée et désinfectez la peau avec 2 solutions successives de povidone iodée.
2. Dérivation gastrique de Roux-en-Y : procédure chirurgicale
- Laparotomie médiane
- Sous un microscope binoculaire et à l’aide d’un scalpel, effectuez une incision médiane du sternum au milieu de l’abdomen pour ouvrir la cavité abdominale (ne pas endommager les muscles abdominaux). Protégez la peau à l’aide d’une compresse stérile imbibée d’une solution saline à 37 °C (figure 1B).
- Membre biliopancréatique et membre digestif
- Extérioriser l’intestin (Figure 1C). Mesurez à 8 cm du pylore et effectuez deux ligatures de l’intestin avec des sutures non résorbables 5.0 (Figure 1D).
- Coupez l’intestin entre les deux ligatures (Figure 1E). Placez le membre proximal des deux extrémités dans le quadrant supérieur gauche de l’abdomen. Remarque : Il sera utilisé comme membre digestif (figure 1F).
- Placez le membre distal des deux extrémités face au membre digestif à 6 cm en dessous du membre proximal (Figure 1F).
note: Celui-ci sera utilisé comme le membre biliaire.
- Jéjuno-jéjunostomie
- Coupez à la fois le membre proximal et l’anse intestinale à l’aide de micro-ciseaux et effectuez deux incisions antitimenériques de la même longueur (Figure 1G et 1H).
- Effectuez une anastomose côte à côte avec deux sutures 8.0 non résorbables. Effectuez d’abord l’anastomose du côté dorsal (Figure 1I), suivie de l’anastomose du côté ventral (Figure 1J).
- Roulez doucement 2 cotons-tiges humidifiés de chaque côté de l’anastomose pour vous assurer que la suture est étanche. Complet avec des sutures non résorbables 8.0 en cas de fuite.
- Gastro-jéjunostomie
- Mobilisez doucement le ventre à l’aide de cotons-tiges humidifiés. Libérez l’estomac de ses attaches latérales proches du tissu conjonctif à l’aide de cotons-tiges humidifiés ou de micro-ciseaux.
- Doucement, extériorisez complètement l’estomac, en plaçant une compresse de collagène hémostatique réabsorbable derrière l’estomac. Effectuez une ligature du pylore à l’aide d’une suture non résorbable 5.0 passée à travers l’épiploon à l’aide de micro-pinces incurvées (Figure 1K et 1L).
- Coupez à la fois la face ventrale de l’estomac, à 1,5 cm du pylore, et le membre distal à l’aide de micro-ciseaux, en créant deux incisions de la même longueur (Figure 1M).
- Effectuez une anastomose côte à côte avec deux sutures 8.0 non résorbables. Commencez par l’anastomose du côté dorsal (Figure 1N), puis effectuez l’anastomose du côté ventral (Figure 1O). Roulez doucement 2 cotons-tiges humidifiés de chaque côté de l’anastomose pour vous assurer que la suture est étanche. Complet avec des sutures non résorbables 8.0 en cas de fuite.
- Fermeture abdominale
- Fermez la couche musculaire de la paroi abdominale à l’aide de sutures non résorbables 5.0 (Figure 1P). Réduire l’anesthésie en réduisant la concentration d’isoflurane à 1 %. Fermez la peau à l’aide de sutures non résorbables 5.0 (Figure 1Q). Administrer 25 mL/kg de solution saline chaude par injection sous-cutanée.
3. Soins postopératoires généraux
- Arrêtez l’isoflurane et continuez avec un débit d’O2 de 0,8 L/min jusqu’à ce que la souris soit complètement réveillée. Ne laissez pas la souris sans surveillance jusqu’à ce qu’elle retrouve le contrôle moteur, indiqué par le fait que l’animal commence à se déplacer dans la cage et qu’il est capable de se tenir debout et de marcher sans tomber.
- Placez la souris (une seule souris par cage) dans un incubateur à une température de 30 °C pendant 5 jours.
- Maintenir les supplémentations en fer (0,5 mg/kg/jour ; injection sous-cutanée) et en vitamine (800 mg/180 mL dans l’eau) chez les souris RYGB jusqu’à la fin du protocole.
- Retour libre à la nourriture diététique en gel (régime en gel riche en matières grasses : 10 % de saindoux, 10 % de sucre liquide, 57 % d’eau) pendant 5 jours après la chirurgie. Réintroduisez un régime solide 3 jours après l’intervention.
- Injecter par voie sous-cutanée de la buprénorphine (0,1 mg/kg, deux fois par jour, du jour 0 au jour 3 après la chirurgie), du méloxicam (1 mg/kg, du jour 0 au jour 3 après la chirurgie), du métoclopramide (1 mg/kg, du jour 0 au jour 5 après la chirurgie) et de la marbofloxacine (10 mg/kg, du jour 0 au jour 3 après la chirurgie)
