Technique de co-culture pour différencier des cellules progénitrices neurales humaines en neurones

Résumé

Source : Su, C. T. E., et al. Une approche optogénétique pour évaluer la formation de connexions neuronales dans un système de co-culture. J. Vis. Exp. (2015).

Cette vidéo présente une méthode pour différencier les cellules progénitrices neurales humaines (NPC) en neurones. Les NPC sont introduits dans une co-culture établie de neurones corticaux astrocytes-rats de souris, favorisant la différenciation des NPC en neurones. La différenciation est confirmée par la visualisation des cellules au microscope confocal.

Protocole

1. Génération de cellules souches pluripotentes induites

1. Cultivez des fibroblastes humains dans du DMEM complété par 10 % de sérum bovin fœtal (FBS) dans des plaques à 6 puits.
2. Avant de commencer la reprogrammation des fibroblastes, enduire 6 puits de Matrigel et incuber pendant au moins une heure à température ambiante. À 80 % de confluence, retirer le milieu des cultures de fibroblastes et laver une fois avec 1 solution saline tamponnée au phosphate (PBS).
3. Ajouter suffisamment de trypsine-EDTA à 0,25 % pour couvrir toute la plaque et incuber à 37 °C pendant 10 min.
4. Une fois que les cellules se sont délogées ....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Kit de reprogrammation épisomale iPSC Epi5	Invitrogen	N° A15960
DMEM/F12	Lonza	12719F
Matrigel	BD Biosciences	354277
Milieu neurobasal	Invitrogen	21103049
Bsa	sigma	A7906
Pbs	Thermo Scientific	SH30028.02
Tube à centrifuger de 15 ml	BD Biosciences	352096
Trypsine-EDTA	Invitrogen	25200056
Tube à centrifuger de 50 ml	BD Biosciences	Référence 352070
Plaques à 24 puits	Corning	9761146
Plaques à 6 puits	Corning	720083
Fioles T25	Corning	430641
Système de transfection au néon	Invitrogen	MPK5000	Pour l’électroporation de fibroblastes humains
Fibroblastes humains dermiques normaux	PromoCell	Réf. C12300
pLenti-Synapsin-hChR2(H134R)-EYFP-WPRE	Addgene	Référence 20945