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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Anesthésie et chirurgie animales
- Pesez et anesthésiez la souris avec votre régime d’anesthésie approuvé par votre comité local de protection des animaux.
- Effectuez un pincement de la queue ou des orteils avec une pince pour confirmer une anesthésie profonde avant la chirurgie.
- Positionnez la souris dans un appareil stéréotaxique et fixez sa tête.
- Appliquez une pommade pour les yeux sur les deux yeux pour les garder humides. Suivez les directives locales en matière de soins aux animaux concernant l’analgésie préopératoire et postopératoire.
- Rasez les cheveux à l’aide d’une tondeuse chirurgicale. Faites une petite incision (12-15 mm) au milieu de la zone chirurgicale exposée avec des ciseaux. À l’aide d’une pince, éloignez doucement le cuir chevelu de la ligne médiane.
- Séparez doucement la peau et éliminez les tissus résiduels. Nettoyez le crâne à l’aide de cotons-tiges enduits de peroxyde d’hydrogène.
- Percez deux petits trous de rayons de 1,0 à 1,5 mm sur les côtés gauche et droit du crâne pour permettre l'insertion des microélectrodes d'enregistrement dans les régions M2 sous un stéréomicroscope (Figure 1A).
note: Localisations stéréotaxiques de M2 bilatérale : 1,94 mm en avant de la bregma, 1,0 mm latéralement à la ligne médiane et 0,8-1,1 mm ventrale à la dure-mère.
- Retirez délicatement la dure-mère à l’aide d’une aiguille en tungstène.
- Tirez des micropipettes en verre borosilicate (diamètre extérieur : 1,0 mm) comme microélectrodes enregistreuses avec une résistance de 1-2 MΩ.
- Insérez deux microélectrodes d’enregistrement séparées remplies de NaCl 0,5 M dans les trous à l’aide de micromanipulateurs mécaniques (à 60°, Figure 1B).
2. Enregistrements LFP dans M2 bilatéral de souris
- Abaissez lentement les électrodes en verre gauche et droite jusqu’aux coordonnées appropriées de M2 bilatéral (Figure 1C).
- Pour le contrôle de la qualité, testez la résistance de chaque électrode à l’aide de l’amplificateur différentiel avant de capturer les LFP.
- Réglez le processus d’enregistrement sur un passe-haut de 0,1 Hz et un passe-bas de 1 000 Hz avec une amplification de 1 000x.
- Collectez des données LFP brutes numérisées d’au moins 60 s d’activités spontanées dans un état stable, avec des souris respirant uniformément à une fréquence respiratoire de 2 respirations par seconde sous anesthésie.
- Après l’enregistrement, soulevez lentement les électrodes du cerveau, puis euthanasiez les souris par luxation cervicale rapide.
- Enregistrez les données et analysez-les hors ligne.
