Perfusion cérébrale stéréotaxique directe de protéines bêta-amyloïdes pour un modèle de maladie d’Alzheimer

Résumé

Source : Jean, Y. Y. et al., Perfusion stéréotaxique de bêta-amyloïde oligomérique dans l’hippocampe de la souris. J. Vis. Exp. (2015)

Cette vidéo démontre l'infusion stéréotaxique précise de bêta-amyloïde dans le gyrus denté pour établir un modèle murin de la maladie d'Alzheimer. La détermination précise des coordonnées et l'administration contrôlée des protéines bêta-amyloïdes entraînent une dégradation neuronale, perturbent le traitement de la mémoire et contribuent au développement de la maladie d'Alzheimer.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Préparer les instruments et les solutions chirurgicaux pour la chirurgie

1. Autoclave tous les instruments chirurgicaux en acier inoxydable.
2. Préparez de l’éthanol à 70 % en diluant de l’éthanol absolu à 200 degrés avec de l’eau distillée désionisée stérile de qualité moléculaire.
3. Fixez l’aiguille 29 G à la seringue Hamilton. Nettoyez l’intérieur de la seringue et de l’aiguille Hamilton en aspirant et en éjectant de l’eau n....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
HCl de kétamine (100mg/ml)	Henry Schein Médical	1049007	100 mg de kétamine par animal de 1 kg
Xylazine (20 mg/ml)	Henry Schein Médical	non disponible	10 mg de xylazine par animal de 1 kg
Aβ1-42	David Teplow/UCLA	non disponible	100 μM ; Cette amyloïde a été utilisée dans l’article
Aβ1-42	Bachem	N° H-1368	Peut être utilisé à la place de l’amyloïde du laboratoire Teplow
Aβ1-42	Peptide américain	62-0-80B	Peut être utilisé à la place de l’amyloïde du laboratoire Teplow
Brouillé Aβ1-42	Peptide américain	Référence 62-0-46B	Peut être utilisé comme peptide de contrôle pour comparer Aβ1-42
GenTeal Gel lubrifiant pour les yeux	Novartis	non disponible	Pour garder les yeux de la souris humides pendant la chirurgie ; peut être trouvé dans les pharmacies locales
Refresh Optive Lubrifiant Gouttes Ophtalmiques	Allergan	non disponible	Pour garder les yeux de la souris humides pendant la chirurgie ; peut être trouvé dans les pharmacies locales ; Peut être utilisé à la place de GenTeal
Bétadine	Stoelting	Référence 50998	Pour assainir et désinfecter
Spatule ronde/conique	VWR	Référence 82027-490	Pour ouvrir la bouche de l’animal
Pinces Bulldog Serrefines (dimensions de la mâchoire 9X1,6 mm ; Longueur 28mm)	Outils scientifiques fins	Référence 18050-28	optionnel; Pour séparer la peau du cuir chevelu pendant l’injection
Ciseaux fins droits (tranchant 25 mm ; Longueur 11,5 cm)	Outils scientifiques fins	Référence 14060-11	Pour couper le cuir chevelu
#3 Manche de scalpel	Outils scientifiques fins	Référence 10003-12
#11 Lame chirurgicale	Outils scientifiques fins	Référence 10011-00	Pour faire une incision du cuir chevelu
Pince à motif standard pour l’étudiant (dim. de la pointe 2,5 x 1,5 mm ; Longueur 11,5 cm)	Outils scientifiques fins	Référence 91100-12	Pour maintenir le cuir chevelu fermé pendant la suture
Kit combo de tondeuse	Kent Scientific	Référence : CL9990-1201	Pour le rasage des poils
Recirculateur d’eau chaude T/Pump	Kent Scientific	TP-700	Pour réchauffer l’animal pendant l’opération
Tampon de minage de guerre réutilisable (5 » x 10 »)	Kent Scientific	TPZ-0510FEA	Pour le fixer au recirculateur d’eau chaude T/Pump afin de réchauffer l’animal pendant l’opération
Microperceuse sans fil	Stoelting	Référence 58610	Utilisez des meules en acier de 0,8 mm pour percer des trous dans le crâne
Instrument stéréotaxique standard de laboratoire avec adaptateur souris et rat néonatal	Stoelting	Référence 51615
Instrument stéréotaxique juste pour souris	Stoelting	Référence 51730	Peut l’utiliser à la place de Stoelting Cat. #51615
Injecteur stéréotaxique par excellence	Stoelting	Référence 53311
Stérilisateur à billes de verre sec	Stoelting	Référence 50287	Pour la stérilisation des instruments en acier inoxydable
Champ chirurgical stérile (18 » x 26 »)	Stoelting	Référence 50981
Seringue Hamilton 50 ml, modèle 705 RN SYR, NDL	Compagnie Hamilton	Référence 7637-01	Pour l’injection cérébrale, utilisez différentes seringues pour différentes solutions
Aiguille de calibre 29, petit moyeu RN NDL	Compagnie Hamilton	Référence 7803-06	Pour la fixation à la seringue Hamilton pour l’injection cérébrale
1 ml de seringues BD Tuberculin	VWR	BD309659	Pour l’administration d’anesthésie et de solution saline
Aiguille de calibre 30 (0,5	VWR	BD305106	Pour l’administration d’anesthésie et de solution saline
Balance électronique portable de la série CS (Ohaus)	VWR	Référence 65500-202	Pour peser les animaux afin de déterminer la dose d’anesthésie
Plaque chauffante (Dim. de la plaque supérieure 7,25 x 7,25 po)	VWR	Référence 47751-148	Pour réchauffer les animaux après la chirurgie
Sofsilk Suture en soie C-1 Coupe 3/8, 12 mm	Covidien	S1173	Pour la fermeture de la plaie
Adhésif tissulaire Vetbond (3M)	Biotechnologie de Santa Cruz	SC-361931	Facultatif : pour aider à la fermeture de la plaie ; À utiliser avec une suture.
Applicateurs stériles à tige en bois à pointe de coton	Fisher scientifique	Tél. : 22-029-488	Pour le nettoyage et le séchage des plaies chirurgicales
Fisherbrand Superfrost Plus Lames de microscope	Fisher Scientific	Référence 12-550-15	Pour le prélèvement de sections cérébrales
VWR Micro Verre de protection 24 X 50 mm	VWR	48393241	Pour le montage de lames de microscope
Thermo Scientific Nalgene Filtre à seringue 0,2 μm	Fisher Scientific	Référence 194-2520	Pour la stérilisation d’une solution saline
Marqueurs cutanés stériles à double pointe de Viscot Medical	Medline	VIS1422SRL91	Pour marquer les coordonnées sur le crâne

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