Génération d’une occlusion de l’artère cérébrale moyenne chez un petit rat pour induire une ischémie cérébrale locale

Résumé

Source : Larpthaveesarp, A., et. al. Modèle d’occlusion transitoire de l’artère cérébrale moyenne d’un accident vasculaire cérébral néonatal chez des rats P10. J. vis. exp. (2017)

Cette vidéo démontre l’établissement du modèle d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne chez un rat. L’artère carotide interne (ICA) est exposée et une ligature est sécurisée pour limiter l’afflux sanguin. Une occlusion est insérée à travers l’ICA pour atteindre l’artère cérébrale moyenne. Le petit est ensuite laissé se rétablir avant une analyse plus approfondie.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le conseil d’examen vétérinaire JoVE.

1. Occlusion de l’artère cérébrale moyenne

1. Pesez le petit et assurez-vous qu’il est du bon poids (19-21 g). Anesthésier le petit avec de l’isoflurane à 3 % et de l’oxygène à 100 % (O₂) et assurez-vous qu’il n’y a pas de réponse à un pincement du pied. Maintenez la température de surface du corps entre 35,5 °C et 37 °C à l’aide d’un coussin chauffant sous la phase chirurgicale.
2. Fixez l’animal en position couchée avec du ruban adhésif sur les épaules. À l’aide de cotons-tiges stériles, frottez la région cervicale antérieure avec une solution de povidone iodée suivie d’un écouvillon d’éthanol à 70 % dans de l’eau doublement distillée, en alternant entre chaque solution pour un total de quatre écouvillons.
3. Infiltrer localement 0,25 % de bupivacaïne dans le site d’incision prévu. À l’aide d’un stéréoscope, faites une incision cervicale antérieure de 5 à 7 mm pour exposer l’artère carotide commune (ACC). Placez 2 à 4 écarteurs pour garder la cavité ouverte et l’artère exposée.
4. Localiser l’artère carotide interne (ICA), l’artère occipitale (OA) et l’artère carotide externe (ECA). Toilettez les artères pour avoir une vue dégagée. Veillez à ne pas déranger le nerf vague.
   REMARQUE : Pour les chiots opérés en simulacre, l’incision est laissée ouverte et les artères sont exposées, après quoi l’incision est suturée fermée. Le temps total d’anesthésie est équivalent à celui de la chirurgie d’occlusion.
5. Coupez 1,5 cm de fil de suture tressé en soie 6-0. Détressez la suture en tirant sur des brins simples. Assurez-vous que les brins simples sont nets et non effilochés.
   REMARQUE : Si nécessaire, lissez les extrémités effilochées en trempant le brin simple dans de l’eau stérile et en toilettant le brin avec des pointes de pince.
6. Tout en tenant le brin de suture avec une pince à 45 degrés, déplacez la pince dans un mouvement d’arc de balayage pour passer sous l’ICA afin que les pointes des pinces émergent entre l’ICA et l’OA.
   REMARQUE : Si la dissection est bien faite, cette étape sera relativement facile. Si l’ICA et l’OA se touchent, veillez à ne pas rompre les artères lorsque vous utilisez la pince pour isoler l’ICA. En cas de saignement, appliquez une pression sur l’artère avec la pince jusqu’à ce que le saignement cesse. Absorbez le sang à l’aide d’un écouvillon stérile.
7. Saisissez l’extrémité du brin de suture qui est maintenue par la pince et tirez-la de manière à ce que l’extrémité soit facile d’accès. Relâchez le brin de la pince et retirez-la de dessous l’ICA, en inversant le mouvement à l’étape 1.5 (Figure 1A).
8. Attachez une ligature temporaire autour de l’ICA à la base, le plus près de l’endroit où il se sépare de l’ACC.
   REMARQUE : Il est important de faire le nœud de manière à ce que l’extrémité du brin qui sera tiré pour retirer le nœud soit suffisamment longue (supérieure à 1 mm, inférieure à 3 mm) pour être facilement saisie avec une pince tout en s’assurant qu’il y a une quantité appropriée de brin de suture de l’autre côté du nœud pour la rétraction.
9. Rétractez soigneusement l’ICA latéralement et utilisez un clip pour fixer le brin à l’excès de peau près de la région de l’aisselle du côté opposé à l’incision. Assurez-vous que ce brin rétractable est suffisamment tendu pour arrêter la circulation sanguine avant de passer à l’étape suivante afin de minimiser le risque de saignement incontrôlé. Observez que l’artère est plate et pâle.
   REMARQUE : Ne vous rétractez pas trop, car cela peut provoquer une déchirure partielle ou complète de l’ICA. La rétraction peut être ajustée juste avant de faire l’artériotomie en tirant sur le brin du côté opposé au clip.
10. À l’aide d’une pince à 45°, saisissez un autre brin de suture non tressé et enroulez-le sous et autour de l’ICA, comme à l’étape 1.5. Positionnez ce brin latéralement au brin de rétraction (Figure 1B).
    REMARQUE : Cette étape peut également être effectuée avant la rétractation. Si vous n’êtes pas sûr de la qualité de la rétraction, ce nœud peut être très lâche avant l’étape suivante.
11. Coupez une artériotomie de 0,2 mm à mi-chemin entre les ligatures attachées et dénouées, en vous rapprochant de la ligature liée.
    REMARQUE : Le sang restant dans l’artère ligotée peut s’écouler par l’artériotomie mais ne doit pas dépasser 5 μL. Si le saignement persiste, tirez avec précaution sur le brin de rétraction pour augmenter la rétraction, en prenant soin d’éviter d’endommager l’artère en raison d’une tension excessive.
12. À l’aide d’une règle métrique, mesurez la suture d’occlusion et coupez la suture avec une marge supplémentaire de 2-3 mm pour retirer l’occlusion lors de la reperfusion. Tenez l’occluseur avec une pince à 45 degrés et utilisez des pinces droites pour créer une courbure à la longueur appropriée pour atteindre le MCA, marquant un point d’arrêt pour l’avancement.
    REMARQUE : Une longueur d’occlusion de 10 mm de l’extrémité de l’embout en silicone à la courbure est utilisée pour les bébés rats postnatals ou P-10 Sprague Dawley ou Long Evans dans cette gamme de poids.
13. À l’aide d’une pince à 45°, introduisez la suture d’occlusion en nylon recouverte de silicone dans l’artériotomie et avancez la suture jusqu’à la courbure qui marque la distance prédéterminée jusqu’à l’ACM (Figure 1C). S’assurer que l’avancement se fait en douceur ; arrêter immédiatement l’avancement si une résistance se fait sentir. Pendant l’avancement, dirigez la suture dans une direction parallèle à la CC/ECA, vers la tête.
    REMARQUE : Si la suture est avancée dorsalement vers la colonne vertébrale de l’animal, elle peut couler dans l’artère ptérygo-palatine (ATP). Si une résistance est ressentie après 3 à 5 mm d’avancement, la suture a atteint la jonction PTA. Reculez l’occluseur hors de l’artère jusqu’à ce que la tête en silicone soit près de l’artériotomie avant d’ajuster la direction de l’avancement. Il n’est pas nécessaire de retirer complètement l’occluseur de l’artériotomie.
14. Fixez l’occlusion en attachant une ligature temporaire à l’aide du brin de l’étape 1.10 (Figure 1D).
15. Retirez le clip de l’enrouleur. Coupez les brins des deux ligatures temporaires de sorte que le brin du nœud qui est tiré pour retirer le nœud soit facile à saisir avec une pince droite et soit plus long que le brin qui est tiré pour resserrer le nœud.
    REMARQUE : Les brins doivent être suffisamment courts pour ne pas s’emmêler dans la cavité après la fermeture.
16. Retirez les écarteurs et fermez la cavité à l’aide de soie tressée 6-0 pour créer trois à quatre sutures interrompues.
17. Retirez le chiot de l’anesthésie et placez-le sur un coussin chauffant à l’air ambiant. Surveillez le petit jusqu’à ce qu’il ait repris une conscience suffisante pour maintenir sa décubitus sternal et assurez-vous qu’il s’est complètement rétabli avant de le ramener à la mère. Assurez-vous que le petit maintient une température de surface corporelle comprise entre 35,5 °C et 37 °C.

Résultats

Figure 1 : Images chirurgicales en direct de la procédure tMCAO. (A) Le premier brin de suture est enroulé autour de l’ICA, comme détaillé à l’étape 1.6. (B) La première ligature temporaire est nouée et l’ICA est rétractée. Le deuxième brin de suture est enroulé autour de l’ICA, latéralement au premier brin de suture, comme détaillé à l’étape 1.9. (C...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Isoflourane	Henry Schein	50033	Anesthésique, à 3 %
trinoculaire Surgioscope	World Precision Instruments	PSMT5N
Coussin chauffant	Sunbeam	000731-500-000	Réglage
Thermomètre IR	Extech Instruments	72-5270
Kit de rétraction pour petits animaux	Fine Science Tools	18200-20
CermaCut Scissors	Fine Science Tools	14958-09
Pince à #5SF Dumont	Fine Science Tools	112522-00	2x
Dumont #5/45 Forceps	Fine Science Tools	11251-35	2x
B-2 Micro Clamp	Fine Science Tools	00398-02
Forcepts for Clamp Application	Fine Science Tools	00072-14
Micro Vannas Scissors	Fine Science Tools	15000-03	2mm tranchant
Occlusion Sutures	Doccol	602123PK10	701712PK5Re
Ruler	Fine Science Tools
6-0 Perma-Hand Silk Reverse CuttingSuture	Ethicon	769G
Euthasol	Virbac	710101	0.22 ml/kg
Applicateurs à pointe de coton	Henry Schein	100-9249
Ruban de laboratoire	VWR	89097-990

faible à moyen