Administration intranasale de médicaments chez la souris à l’aide d’une pipette et canulation inverse pour l’administration de médicaments du nez au cerveau

Résumé

Source : Kanazawa, T., et al. Nouvelles méthodes d’administration intranasale sous anesthésie par inhalation pour évaluer l’administration de médicaments du nez au cerveau. J. Vis. Exp. (2018)

Cette vidéo montre l’administration intranasale de médicaments radiomarqués chez une souris anesthésiée pour obtenir une administration de médicament du nez au cerveau. Il explique comment les médicaments traversent l’épithélium nasal et voyagent par les voies neuronales pour atteindre le cerveau, ainsi que comment le mouvement ciliaire influence la rétention et la clairance des médicaments. De plus, la vidéo décrit une méthode alternative de canulation inversée, qui consiste à insérer une canule dans l’œsophage pour délivrer des médicaments contre le mouvement ciliaire, améliorant ainsi la rétention et améliorant l’efficacité du transport.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Animaux utilisés pour l’administration intranasale sous anesthésie par inhalation

1. Hébergez les souris expérimentales dans des cages en acier inoxydable sous un cycle lumière/obscurité de 12 heures (lumière de 8h00 à 20h00), avec une température contrôlée maintenue à 23 ± 1°C, une humidité de 50 % ± 10 % et un accès ad libitum à la nourriture et à l’eau.
2. Avant l’expérimentation, anesthésier les souris par inhalation d’isoflurane à 2 %, après l’initiation à une concentration de 4 %. Confirmez le niveau d’anesthésie requis en vérifiant la disparition du redressement de surface.

2. Préparation de la solution d’administration

1. Préparez une solution d’administration de [¹⁴C]-inuline (50 μM, 0,5 μCi/mL par souris) en la diluant dans une solution saline tamponnée au phosphate, et conservez-la à 4 °C jusqu’à ce qu’elle soit utilisée.

3. Administration intranasale pour souris

1. Méthode de micropipette à l’aide d’un masque d’inhalation temporairement ouvrable (Figure 1)
   1. Fixez les souris en position couchée sur un tableau de liaison en collant leurs membres sous anesthésie par inhalation avec de l’isoflurane à 2 % (Figure 1A).
   2. Administrer un volume total de solution d’administration de 25 μL à chaque souris à intervalles de 30 secondes, par le biais de doses de 1 à 2 μL administrées alternativement dans les narines gauche et droite pendant que les souris sont fixées sous anesthésie par inhalation (figures 1B et C).
   3. Remarque : Les gaz anesthésiques résiduels sont récupérés par des moyens actifs (hotte, enceinte de biosécurité à conduit rigide, aspirateur, etc.) lorsque le masque est ouvert et par des moyens passifs (bidon de gaz anesthésique résiduaire) lorsqu’il est fermé.
2. Méthode de canulation inverse du côté des voies respiratoires à travers l’œsophage (Figure 2)
   1. Fixez les souris en position couchée sur un tableau en liège en collant leurs membres sous anesthésie par inhalation avec 2 % d’isoflurane.
   2. Les poils du cou sont rasés et préparés par une application de bétadine ou de chlorhexidine, suivie d’un rinçage à l’alcool.
   3. Exposez la trachée et l’œsophage en élargissant la peau sous la gorge à l’aide d’une pince après avoir fait une petite incision (1,5 cm) avec des ciseaux.
   4. Faites une incision (1 mm) dans la trachée à l’aide de ciseaux.
   5. Insérez une canule (diamètre intérieur : 0,58 mm, diamètre extérieur : 0,965 mm) sur une longueur de 1,2 cm et fixez l’extrémité opposée de la canule à l’intérieur du masque d’inhalation.
   6. Faites une incision (1 mm) dans l’œsophage à l’aide de ciseaux, insérez une canule (diamètre intérieur : 0,28 mm, diamètre extérieur : 0,61 mm) sur une longueur de 1,4 cm vers la partie postérieure de la cavité nasale, et ligaturez-la (Figure 2A et B). Remarque : Les procédures 3.2.2 à 3.2.4 ont été exécutées au microscope stéréoscopique à un grossissement de ×10.
   7. Fixez une aiguille (27G × 1/2) à une seringue de 1 mL remplie d’une solution d’administration et connectez-la à un micro-pousse-seringue programmable.
   8. Connectez l’aiguille ci-dessus à la canule qui a été insérée dans l’œsophage en 3.2.5 (Figure 2C).
   9. Administrer un volume total de 25 μL [¹⁴C]-solution d’inuline à un débit constant (5 μL/min) (figures 2C et 2D).

Résultats

Figure 1 : Administration intranasale à l’aide d’une micropipette associée à un masque d’inhalation temporairement ouvrant. Photographies montrant une souris fixe (A) avec un masque fermé avant l’administration, (B) un gros plan et ...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
ddY mouse	Japan SLC, Inc.		Mâle, 4-6 semaines, 20-30 g
Isoflurane	Pfizer	v002139
Isoflurane setup	SHINANO manufacturing CO. LTD.	SN-487-OTAir, SN-489-4
Masque isoflurane	SHINANO manufacturing CO. LTD.		Pour les petits rongeurs
Masque isoflurane (type Opneable)	SHINANO manufacturing CO. LTD.		Commandes spéciales
Boîte d’anesthésie	SHINANO manufacturing CO. LTD.	SN-487-85-02
Ciseaux d’expérimentation animale-1	NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.	B-27H
Ciseaux d’expérimentation animale-2	NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.	B-13H
Pince à épiler-1	FINE SCIENCE TOOLS Inc.	11272-30	Dumont #7 Pince
épiler Dumoxel-2	NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.	A-12-1
Tube de canule (PE-50)	Becton, Dickinson and Company.	5069773	D.E. : 0,58 mm, D.E. : 0,965 mm
Tube de canule (SP-10)	NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.	KN-392	D.I. : 0,28 mm, D.E. : 0,61 mm
Rasoir	MARUKAN, LTD.	DC-381
Microscope stéréoscopique	Olympus Corporation	SZ61
Aiguille 27G 1/2 po 13 mm	TERUMO CORPORATION	NN-2738R
Seringue 1 mL	TERUMO CORPORATION	SS-01T
Pousse-seringue	Neuro science	NE-1000
Micro spatule	Shimizu Akira Inc.	91-0088
Micropipette (0,5-10 uL)	Eppendorf AG	Z368083
Pipette à puce	Eppendorf AG	0030 000.811
Tape	TimeMed Labeling System, Inc.	T-534-R	Pour la fixation de la souris
[¹⁴C]-Inuline	American Radiolabeled Chemicals Inc.	ARC0124A	0,1 mCi/mL
EtOH	Wako Pure Chemical Industries, Ltd.	Référence 054-00461

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