Administration intraveineuse de vecteurs viraux adéno-associés recombinants dans un modèle de rat

Résumé

Source : Grames, M. S., et al. Méthodes et conseils pour l’administration intraveineuse de virus adéno-associé à des rats et l’évaluation de la transduction du système nerveux central. J. Vis. Exp. (2017)

Cette vidéo montre l’injection dans la veine caudale du virus adéno-associé recombinant (AAV) chez le rat. Après injection dans la veine latérale de la queue, le virus pénètre dans la circulation sanguine, circule dans le cœur et atteint le cerveau, où il pénètre dans les neurones et facilite la production de protéines cibles pour des applications neurothérapeutiques.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Préparez le rat

1. Augmentez l’oxygène à 1 L/min et réglez l’anesthésie à l’isoflurane à 5 %. Assurez-vous que l’anesthésie gazeuse s’écoule vers la chambre d’induction en vérifiant toutes les orientations des tuyaux de raccordement et des robinets d’arrêt.
2. Placez le rat dans la chambre d’induction de l’anesthésie gazeuse pendant environ 3 minutes jusqu’à ce qu’il ne réponde plus.
3. Assurez-vous que l’anesthésie est suffisamment profonde en pinçant l’orteil. Il ne doit y avoir aucun mouvement dans le pied ou la jambe après le pincement de l’orteil.
4. Réduire l’anesthésie à l’isoflurane à 2 % pour l’entretien et ajuster le robinet d’arrêt de manière à ce que l’anesthésie s’écoule vers le masque d’anesthésie.
5. Placez le nez du rat dans le masque d’anesthésie et ajustez le rat de manière à ce qu’il soit couché sur le côté.
6. Identifiez la nervure latérale de la queue.
   REMARQUE : Les nervures latérales de la queue se trouvent à environ 10 et 2 heures, et le haut dorsal de la queue à 12 heures. Avec le rat couché sur le côté, la veine latérale de la queue doit être tournée vers le haut.
7. Essuyez la zone d’injection avec le tampon de préparation d’alcool. Le site d’injection se trouve aux deux tiers de la longueur de la queue.

2. Injectez le vector

1. Tenez fermement la queue légèrement au-dessus de la zone d’injection avec un doigt directement sur la veine latérale de la queue, cela dilatera la veine.
2. Avec le biseau vers le haut, alignez l’aiguille avec la veine visible de la queue dans la même direction.
3. Percez la peau de la veine de la queue en prenant grand soin d’éviter que l’autre main ne tienne la queue et n’appuie sur la veine de la queue.
4. Relâchez la pression de la veine de la queue pour permettre une circulation sanguine normale.
5. Déplacez l’aiguille dans la veine. Pour vous assurer que l’aiguille a perforé la veine de la queue, tirez légèrement sur le piston. Si l’aiguille est dans la veine, le sang coulera dans l’aiguille.
   1. Repositionnez l’aiguille au besoin. Ensuite, pour stabiliser l’aiguille, déplacez la main au-dessus du site d’injection vers le dessous du site d’injection et tenez l’extrémité de la seringue contre la queue.
6. Injectez lentement le vecteur dans la queue (environ 20 μL/s).
   REMARQUE : La veine peut perdre de sa couleur au fur et à mesure que le vecteur la traverse. Les signes que la solution a été injectée à l’extérieur de la veine comprennent des boursouflures, un blanchiment de la peau ou une résistance lors de l’injection du vecteur. Avec de la pratique, l’exposition extra-vasculaire peut être minimisée.
7. Une fois le vecteur administré, retirez l’aiguille du rat et appuyez un tampon de gaze contre le site d’injection pour aider à arrêter le saignement pendant 30 à 60 secondes.

3. Nettoyage

1. Coupez l’isoflurane anesthésique et l’oxygène. Surveillez le rat jusqu’à ce qu’il reprenne conscience, puis renvoyez-le dans sa cage.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Seringue BD de 1 ml		309626	Livré avec une aiguille de 25g attachée. Remplacer par une aiguille injectable de 27-30 g Aiguille
30 g	BD	305106
Isoflurane	Piramal Healthcare	66794-013-25	Isoflurane USP 250 mL
Masque d’anesthésie	Kopf Instruments	906
Gauze	Henry Schein	100-2524	2 » x 2 » (5 cm x 5 cm)
Vaporisateur d’anesthésie gazeuse	SurgiVet	4214322	T3 classique
Piégeur d’anesthésie au gaz	SurgiVet	32373B10	Enviro-PURE
Coussin chauffant	Sears	17280
70 % éthanol	Decon Laboratories, Inc.	2401	140 preuve
70 % Isopropanol	VWR	89108-160

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