Drosophila melanogaster est un système modèle génétiquement et comportemental souple qui a été utilisée pour comprendre la base moléculaire et cellulaire de nombreux processus biologiques importants pour plus d'un siècle 1. Drosophile a été bien exploitée afin de mieux comprendre la base génétique du comportement à la mouche.
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Article de méthode
Méthodes de dosage à Drosophila Comportement
Dans cet article
Résumé
Résumé
Drosophila melanogaster, la mouche des fruits, a été utilisé pour étudier les mécanismes moléculaires d'un large éventail de maladies humaines comme le cancer, les maladies cardiovasculaires et de diverses maladies neurologiques 1. Nous avons optimisé simples et robustes tests comportementaux pour déterminer locomotion de la larve, la capacité d'escalade adulte (dosage RING), et les comportements de séduction de la drosophile. Ces tests comportementaux sont largement applicables pour étudier le rôle des facteurs génétiques et environnementaux sur le comportement à la mouche. La capacité de ramper larvaire peut être utilisé de manière fiable pour déterminer les changements à un stade précoce dans les capacités rampants de larves de drosophile et aussi pour examiner l'effet de médicaments ou de gènes de maladies humaines (des mouches transgéniques) sur leur locomotion. Le dosage des larves rampant devient plus applicable si l'expression ou la suppression d'un gène provoque une létalité à un stade nymphal ou adulte, que ces mouches ne survivent pas à l'âge adulte où ils pourraient par ailleurs être évalué. Cette base, unssay peut également être utilisé en conjonction avec la lumière vive ou le stress d'examiner d'autres réponses comportementales chez les larves de Drosophila. Comportement de cour a été largement utilisée pour étudier les bases génétiques du comportement sexuel, et peut également être utilisé pour examiner l'activité et de la coordination, ainsi que l'apprentissage et la mémoire. Comportement de cour chez la drosophile implique l'échange de divers stimuli sensoriels, y compris visuelles, auditives, et les signaux chimiosensoriels entre les hommes et les femmes qui mènent à une série complexe de comportements moteurs bien caractérisés ont abouti à la copulation avec succès. Dosages adultes traditionnels d'escalade (géotaxie négatifs) sont fastidieux, de main-d'œuvre, et prend du temps, avec une variation significative entre les différents essais 2-4. Le itératif rapide géotaxie négative (RING) test 5 a de nombreux avantages sur des protocoles plus largement utilisés, en fournissant une approche débit reproductible, sensible, et de haute de quantifier locomotrice des adultes et négatifs géotaxie behaviors. Dans le test RING, plusieurs génotypes ou de traitements médicamenteux peuvent être testés simultanément en utilisant grand nombre d'animaux, à l'approche à haut débit rend plus propice pour des expériences de dépistage.
Protocole
Essai A. Crawling larvaire
1. Collection larves
- Mettre en place une bouteille de 8 oz de mouches (10-15 mâles + femelles 10-15).
- Laissez-mouches pondent leurs œufs pendant 24 heures, puis de bouteilles claire de mouches. (Transfert des adultes dans un nouveau flacon et répéter au besoin).
- Incuber bouteille pendant 3-4 jours, ou jusqu'au troisième stade larvaire sont visibles.
- Ajouter 50 à 100 ml de saccharose à 20% à la bouteille avec les larves et les laisser reposer pendant 20 minutes. Les larves flottent à la surface.
- Recueillir les larves à l'aide d'une pipette de 25 ml sérol....
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Discussion
Comportement chez la drosophile est étroitement régulée par des facteurs génétiques et environnementaux. Nous, et d'autres, ont déjà utilisé les tests décrits ici pour recueillir des données afin d'examiner les gènes liés à voler et à des comportements humains les maladies neurodégénératives modélisés chez la drosophile 5-19. Pour le dosage de l'exploration, la sélection minutieuse de 3 e stade larvaire est une étape critique. Si le traitement avec un médicament, il fa.......
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Déclarations de divulgation
Nous n'avons rien à communiquer.
Remerciements
Nous tenons à remercier Astha Maltare pour générer les données crawling larvaires. Nous tenons à remercier le Dr Nicholas Lanson Jr. pour donner ses commentaires sur le manuscrit. Ce travail a été soutenu par le Centre Robert Packard pour la SLA à l'Université Johns Hopkins (à l'UBP) et le Sclérose latérale amyotrophique Association (UBP), et R01MH083689 de la National Institutes of Mental Health (CDN).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Nom du réactif | Entreprise | Numéro de catalogue | |
| Saccharose | Fisher Scientific | S5-500 | |
| Agarose | Invitrogen | 16500-500 | |
| 6 oz Drosophila bouteille | Genesee scientifique | 32-130 | |
| Paint Brush (# 1) | Ted Pella, Inc | 11859 | |
| Fly composants alimentaires | |||
| Semoule de maïs | Fisher Scientific | NC9109741 | |
| Gélose | Genesee scientifique | 66-104 | |
| Mélasse | Fisher Scientific | NC9349176 | |
| L'acide propionique | Acros | 14930-0010 | |
| Tegosept | Apex | 20-258 | |
| L'éthanol | PêcheurScientifique | BP2818-4 | |
| Levure | Genesee scientifique | 62-107 |
Références
- Pandey, U. B., Nichols, C. D. Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery. Pharmacol. Rev. 63 (2), 411-436 (2011).
- Feany, M. B., Bender, W. W. A Drosophila model of Parkinson's disease. Nature Mar.
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Réimpressions et autorisations
