Évaluation ex vivo de la contractilité, fatigabilité et isolées du Alternans muscles squelettiques

Résumé

Nous décrivons une méthode pour mesurer directement la force musculaire, la force musculaire, de la cinétique contractile et la fatigabilité des muscles squelettiques isolés dans un In vitro Système en utilisant une stimulation de champ. Des informations précieuses sur Ca ^{2 +} Propriétés de manipulation et de la machinerie contractile du muscle peuvent être obtenues en utilisant différents protocoles de stimulation.

Résumé

Décrit ici est une méthode de mesure de la contractilité des muscles squelettiques isolés. Des paramètres tels que la force musculaire, la force musculaire, de la cinétique contractile, la fatigabilité, la fatigue et la récupération après peuvent être obtenues à évaluer des aspects spécifiques du couplage excitation-contraction (ECC) de processus tels que l'excitabilité, contractile machines et Ca ^{2 +} capacité de manutention. Cette méthode supprime l'innervation et de sang et se concentre sur le muscle squelettique isolé lui-même. Nous avons l'habitude d'utiliser cette méthode pour identifier les composantes génétiques qui altèrent la propriété contractile du muscle squelettique si moduler Ca ^{2 +} voies de signalisation. Ici, nous décrivons un phénotype musculaire squelettique nouvellement identifiés, à savoir l'alternance mécanique, comme par exemple des informations diverses et riche qui peut être obtenu en utilisant le test in vitro avec la contractilité du muscle. Combinaison de ce test avec des dosages de cellules simples, des approches génétiques et biochimiquestests strY peut fournir des indications importantes sur les mécanismes de ECC dans le muscle squelettique.

Introduction

Attacher les muscles du squelette à os du squelette et de générer des forces de contraction sous le contrôle du système nerveux central. Couplage excitation-contraction (CEC) se réfère au processus de conversion d'un stimulus électrique à une réponse mécanique. Ca ^{2 +} signalisation est une composante essentielle de la fonction contractile dans le muscle squelettique. Efficace de mobilisation de Ca ^{2 +} du réticulum sarcoplasmique (SR) est une composante importante de la CPE en ^{1, 2} cellules musculaires, et les variations de Ca ^{2 +} intracellulaire de signalisation sous-tendent la dysfonction co....

Protocole

Composition de la solution:

2,5 mM de Ca ^{2 +} Tyrode solution: NaCl 140 mM, KCl 5 mM, HEPES 10 mM, 2,5 mM de _CaCl2, MgCl2 ₂ mM et 10 mM de glucose

0 mM Ca ^{2 +} Tyrode solution: NaCl 140 mM, KCl 5 mM, HEPES 10 mM, MgCl2 ₂ mM, 0,1 mM d'éthylène glycol tétraacétique (EGTA) et 10 mM de glucose

Note: La solution de baignade devrait être saturé avec 100% d'O ₂ si vous utilisez la solution ci-dessus, mais avec 95% d'O ₂ avec 5% de CO ₂ si l'utilisation des tampons à base de bicarbonate pour ....

Discussion

Mesure de la force contractile et la fatigabilité est important pour l'évaluation globale de la fonction du muscle squelettique. Le but principal de cet essai est d'identifier les changements dans la force musculaire et la fatigue engendrée par les propriétés sous certaines conditions pathologiques, comme la sarcopénie et la fatigue musculaire, et de tester l'effet de la drogue / réactifs sur la contractilité musculaire. Puisque la force musculaire est étroitement liée avec intracellulaire Ca ^{2 +,}.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Nom du réactif	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires (optionnel)
2-APB	Tocris	1224	Bloqueur d'un certain nombre de Ca 2 + canaux d'entrée, y compris SOC et TRP etc
SKF96365	Sigma	SKF-96365	Bloqueur d'un certain nombre de canaux Ca 2 +, y compris l'entrée SOC et médiée par les récepteurs d'entrée de Ca 2 +, etc
BTP-2	Millipore	203890-5MG	Relativement spécifique bloquant SOC
CPA	Sigma	C1530	Réversible bloqueur SERCA
caféine	Sigma	C0750	Rapide agoniste RyR d'action
Radnoti Quatre tissus Unité bain de systèmes d'organes	Radnoti	159920
Soutien tissus Combinaison / électrode de stimulation	Radnoti	160151	Vertical Type de Zig Zag avec le soutien des tissus
Quad Pont Amp	ADInstruments	FE224
PowerLab/400	ADInstruments		Ce produit n'est plus disponible. Choisir une autre version du système d'acquisition de données.
Capteurs de force (5 mg - 25 g)	ADInstruments	MLT0201/RAD
Tableau v4.02	ADInstruments		LabChart 7.3 est la dernière version du logiciel graphique.
S8800 double impulsion numérique Stimulator	TECHNOLOGIES GRASS		Ce produit n'est plus disponible. S88X double sortie impulsion carrée Stimulator est un nouveau stimulateur.
Unité RF transformateur d'isolement	TECHNOLOGIES GRASS	Modèle SIU5