L'établissement d'un modèle de la vessie orthotopique tumeur à évaluer les effets antitumoraux de Sarna par voie intravésicale livré et suivi de la croissance tumorale par échographie et l'imagerie bioluminescente.
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Article de méthode
Un modèle de la vessie orthotopique tumorale et l'évaluation de Sarna traitement intravésicale
* These authors contributed equally
Dans cet article
Résumé
Résumé
Nous présentons une nouvelle méthode pour traiter le cancer de la vessie avec intravésicale livré activation petit ARN (SARNA) dans un modèle de xénogreffe de souris tumeur orthotopique de la vessie. Le modèle de la souris est mis en place par cathétérisme urétral sous anesthésie générale par inhalation. Brûlure chimique est ensuite introduit à la muqueuse de la vessie à l'aide intravésicale solution de nitrate d'argent pour perturber la couche glycosaminoglycane de la vessie et permet aux cellules d'attacher. Après plusieurs lavages à l'eau stérile, cancer de la vessie humaine KU-7-luc2-GFP cellules sont inculquées à travers le cathéter dans la vessie pour habiter pendant 2 heures. La croissance ultérieure de tumeurs de la vessie est confirmée et surveillée par échographie de la vessie dans l'imagerie in vivo et bioluminescente. Les tumeurs sont alors traitées par voie intravésicale avec SARNA formulée dans des nanoparticules lipidiques (LNPs). La croissance tumorale est contrôlée par échographie et la bioluminescence. Toutes les étapes de cette procédure sont mises en évidence dans la vidéo qui l'accompagne.
Protocole
Procédures portant sur des sujets animaux ont été approuvés par le soin des animaux et le Comité institutionnel d'utilisation (IACUC) à l'Université de Californie, San Francisco.
1. Préparation des cellules
- La ligne de cellules humaines de cancer de la vessie KU-7-luc2-GFP (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA) est cultivé dans un milieu RPMI-1640 supplémenté avec 10% sérum de veau foetal et 50 pg / ml de gentamicine.
- Les cultures sont maintenues à 37 ° C, 5% de CO 2 avec les médias change tous les deux à trois jours.
- Les cellules ont été récoltées par digestion à la trypsine et comptées à....
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Discussion
Nous présentons un protocole pour la mise en place d'une souris modèle de xénogreffes tumorales de la vessie orthotopique suivie d'un traitement par voie intravésicale des tumeurs avec SARNA TNL formulé qui cible le promoteur de p21 CIP1/WAF1 (p21) pour l'activation transcriptionnelle. 2, 3 Les tumeurs qui en résultent peuvent être confirmée et surveillée par imagerie bioluminescente et l'échographie de la vessie. Modèles orthotopiques peut être supérieure à intrapéritonéale, sous-c.......
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Déclarations de divulgation
LCL est un inventeur nommé dans l'attente des demandes de brevet liées à SARNA qui ont été déposés par l'Université de Californie à San Francisco et autorisé à Alnylam Pharmaceuticals.
Remerciements
Cette recherche est financée par l'AACR Henry Shepard vessie Cancer Research Grant (09-60-30-LI).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Nom du réactif | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires (optionnel) |
| KU-7-luc-cellules GFP | Caliper | 128091 | |
| thymiques chez la souris nude (nu / nu) | Laboratoires Simonsen | 6-7 semaines | Sim: (RCN) nu / nu Fisol |
| Appareil à ultrasons | Visualsonics | Vevo 770 | RMV-704 de sonde |
| Unité de bioluminescence | Caliper | IVIS spectre | |
| Exel safelet cathéter | Pêcheur | 14-841-21 | 24G X ¾ " |
| Le nitrate d'argent | Sigma | S8157 | |
| Hamilton seringue | Hamilton company | 80301 | |
| TNL-SARNA | Pharmaceuticals Alnylam |
Tableau 1. Réactifs et équipements spécifiques.
Références
- Semple, S. C. Rational design of cationic lipids for siRNA delivery. Nature. 28, 172-176 (2010).
- Li, L. C. Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United St....
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Réimpressions et autorisations
