La perfusion intravasculaire de carbone d'encre noire permet une visualisation fiable des vaisseaux cérébraux

Résumé

Analyse de l'anatomie vasculaire cérébral des rongeurs joue un rôle important dans la recherche sur l'AVC expérimental. Dans ce contexte, la perfusion intravasculaire avec du latex coloré a été considéré comme un outil standard pour plusieurs années. Cependant, cette technique implique des limitations techniques distinctes, qui nuisent à sa reproductibilité. Nous décrivons ici une méthode simple pour visualiser les vaisseaux cérébraux de façon reproductible. Injection d'un mélange de deux encres noires de carbone disponibles dans le commerce par le biais des résultats du myocarde du ventricule gauche dans le remplissage adéquat des vaisseaux cérébraux avec visualisation à contraste élevé. Nous avons appliqué avec succès cette technique pour identifier les points anastomotiques entre les territoires vasculaires cérébraux de souris avec différents fonds génétiques. Nous avons finalement témoigner que ce nouveau procédé et simple pour la coloration navire peut être combiné avec du chlorure de triphényltétrazolium (TTC) coloration - un outil largement utilisé pour observer et analyser volumes d'infarctus chez la souris.

Résumé

La structure anatomique des vaisseaux cérébraux est un facteur déterminant pour l'hémodynamie du cerveau ainsi que la gravité des blessures à la suite lésions ischémiques. Le système vasculaire cérébral répond dynamiquement aux différents états physiopathologiques et elle présente des différences considérables entre les souches et dans des conditions de manipulations génétiques. Essentiellement, une technique fiable pour la coloration vaisseaux intracrâniens est indispensable pour étudier la pathogenèse de l'AVC ischémique. Jusqu'à tout récemment, un ensemble de techniques différentes ont été utilisées pour visualiser la vascularisation cérébrale, y compris l'injection de résine de faible viscosité, araldite F, de la gélatine mélangée avec divers colorants ¹ (c.-à-rouge carmin, encre de Chine) ou en latex avec ² ou sans ³ du noir de carbone. Perfusion de latex composé blanc à travers l'aorte ascendante a été d'abord rapporté par Coyle et Jokelainen ^3. Maeda et al. ² ont modifié le protocole en ajoutant carbon encre noire pour le composé de latex pour un meilleur contraste de visualisation des vaisseaux après une perfusion saline du cerveau. Cependant, la perfusion inefficace et un mauvais remplissage des navires sont souvent vécu en raison de la viscosité élevée du composé de latex ^4. Par conséquent, nous avons décrit une technique simple et rentable en utilisant un mélange de deux encres de carbone commercialement disponibles noir (CB1 et CB2) pour visualiser la vascularisation cérébrale de façon reproductible ^5. Nous avons montré que la perfusion avec CB1 CB2 + dans les résultats de la souris, la coloration des vaisseaux cérébraux significativement plus petits à une densité plus élevée par rapport à la perfusion latex ^5. Ici, nous décrivons notre protocole d'identifier les points anastomotiques entre la partie antérieure (ACA) et les artères cérébrales moyennes (MCA) pour étudier les variations des navires dans les souris de différentes origines génétiques. Finalement, nous démontrons la faisabilité de notre technique dans un modèle transitoire ischémie cérébrale focale chez la souris en combinant CB1 +Coloration navire CB2 médiée par coloration TTC à des degrés divers de lésions ischémiques.

Protocole

1. Animaux

1. Des expériences ont été réalisées selon les directives du NIH pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire et approuvé par les autorités locales. Pour toutes les expériences, C57BL6 / J souris de type sauvage, apolipoprotéine ^{- / -} (ApoE KO) et SV129 souris (12-16 semaines, 26-30 g de poids corporel, 5-6 animaux par groupe expérimental) ont été utilisés.

2. Coloration des vaisseaux cérébraux avec du latex coloré

1. Préparer un mélange de 25 ul encre de carbone noir (Herlitz, Allemagne) avec 0,5 ml de composé de latex (Pébéo, France) dans un rapport 1:20 dans un tube PE et fait....

Résultats

Le protocole décrit ici permet de surmonter les limitations techniques de visualisation classique à base de latex de la vascularisation cérébrale de rongeurs. La figure 1A montre que la perfusion suivante du latex coloré, seuls les grands navires sur la face ventrale sont tachés, laissant toute la face dorsale non colorées. Le résultat est également très variable. Un seul animal sur six spectacles de coloration partielle de l'ACA et le MCA visible sur la face dorsale du cerveau (données non présenté.......

Discussion

La perfusion de CB1 CB2 + par injection manuelle peut être effectuée avec succès par l'absence de formation intensive car il ne comporte pas de dispositif spécifique pour impliquer une certaine pression ^2,3. L'hétérogénéité des résultats de perfusion dans notre protocole est également négligeable. 1 seul animal sur 16 animaux non ischémiques et 3 des 20 animaux ischémiques ont montré perfusion incomplète. Dans ces cas, l'incorporation de bulles pendant la perfusion saline conduisant à l'occlus.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Nom du réactif	Nom de la société	Catalog No.
Scribtol Schwarz (CB2)	Pelican, Allemagne	221 135
Stempelfarbe (CB1)	Herlitz PBS AG, Allemagne	10417202
Gedeo Latex	Pébéo, France	13042B