Les modèles de souris pour l'artériosclérose Graft

Résumé

Nous décrivons les protocoles de nos arteriosclerois de greffe de souris (GA) des modèles qui impliquent interposition d'un segment de vaisseau de la souris sur un receveur de la même souche consanguine. Par rétrocroisant changements génétiques dans le donneur de navire, le modèle permet d'évaluer l'effet de gènes spécifiques sur GA.

Résumé

Arteriosclerois greffés (GA), également appelés vasculopathie d'allogreffe, est une lésion pathologique qui se développe au fil des mois ou des années dans les organes transplantés caractérisées par diffus, une sténose circonférentielle de l'ensemble de l'arborescence vasculaire du greffon. L'élément le plus critique de GA pathogénie est la prolifération des cellules musculaires lisses, comme au sein de l'intima. Quand un segment d'artère coronaire humaine est intercalé dans la aorte sous-rénale de souris immunodéficientes, les intimas pourraient être développer en réponse à lymphocytes T humains par transfert adoptif allogénique pour le donateur de l'artère ou exogène humain IFN-γ en l'absence de cellules T humaines. Interposition d'une aorte de souris d'une souche dans un autre destinataire de la souche de souris est limitée comme un modèle pour le rejet chronique chez l'homme, car la réponse de rejet à médiation cellulaire aigu dans ce modèle de souris élimine complètement toutes les cellules vasculaires dérivées du donneur de la greffe dans les deux-trois semaines. Nous avons récemment développé deux nouveaux mOuse modèles de contourner ces problèmes. Le premier modèle comporte l'interposition d'un segment de vaisseau à partir d'une souris mâle dans une femelle receveuse de la même souche pure (C57BL/6J). Le rejet de greffe dans cette affaire est dirigée uniquement contre les antigènes mineurs d'histocompatibilité codées par le chromosome Y (présent chez l'homme, mais pas la femelle) et la réponse de rejet qui s'ensuit est assez indolent de préserver les cellules musculaires lisses dérivées du donneur pendant plusieurs semaines. Le deuxième modèle comprend l'interposition d'un segment d'artère d'un type C57BL/6J donneur de souris sauvage dans une souris hôte de la même souche et le sexe qui n'a pas le récepteur de l'IFN-γ, suivi par l'administration de souris IFN-γ (envoyé par l'infection de la souris foie avec un vecteur adénoviral. Il n'ya pas de rejet dans ce cas comme donneur et souris receveuses sont de la même souche et le sexe, mais les cellules musculaires lisses des donateurs prolifèrent en réponse à la cytokine tandis que les cellules dérivées de l'hôte, manquant de récepteurs pourcette cytokine, sont insensibles. Par rétrocroisant changements génétiques dans le donneur de navire, les deux modèles peuvent être utilisés pour évaluer l'effet de gènes spécifiques sur la progression GA. Ici, nous décrivons des protocoles détaillés pour nos modèles GA de souris.

Introduction

Arteriosclerois greffés (GA), également appelés vasculopathie d'allogreffe, est une lésion pathologique qui se développe au fil des mois ou des années dans les organes transplantés caractérisées par diffus, une sténose circonférentielle de l'ensemble de l'arborescence vasculaire du greffon ^7. Les stades précoces peuvent provoquer des sténoses excentriques et focal qui sont plus évidentes dans les artères, ce qui ressemble davantage sténoses observées dans l'athérosclérose conventionnel. La perte de la lumière des vaisseaux greffés résulte de l'expansion intimale due à l'infiltration de cellules et les macrophages T hôte et en partic....

Protocole

allogreffe de la souris et syngénéique modèle de transplantation de greffe

Toutes les études sur les animaux ont été approuvés par l'Institutional Animal Care et comités de l'utilisation de l'Université de Yale. Pour le modèle d'allogreffe, les segments de l'aorte thoracique du mâle, semaine 4-5 ancien WT (C57BL/6J) ou souris IFN-yR-KO sont interposés dans l'aorte abdominale du récipiendaire féminine, 8-12 semaine WT aide d'un bout à la fin de microchirurgie technique d'anastomose (voir prochaine pour plus de détails). Pour le modèle de greffe syngénique, des segments de aorte thoracique de Male, 4-5 semaines ....

Résultats

Modèle souris allogreffe artériosclérose (GA): Dans ce modèle, une aorte du donneur masculin est transplanté dans récipiendaire féminine afin que l'hôte induit réponses T allo-immunes à médiation cellulaire alloréactives contre un antigène mineur de Y (l'antigène d'histocompatibilité mineure HY spécifiques au mâle) exprimé sur le greffon ^12, et à son tour des cellules T IFN-γ produite lecteurs VSMC prolifération ²⁰ comme on l'observe dans d'autres modèles de transplantation d'allog.......

Discussion

Les protocoles décrits sont axés sur les modèles GA souris. Les procédures peuvent être appliquées à d'autres modèles de transplantation de greffons. Ces modèles comprennent xénogreffe humanisée (c. segments d'artère coronaire de l'homme interposés dans le aortes infra-rénale de souris immunodéficientes), et le rejet aigu souris modèle GA (soit une aorte de souris d'une souche génétique dans un autre destinataire de souche génétique). Nos modèles de souris décrites ne sont plus à fermer.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
C57BL/6J (H-2b)	Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME)	000664	Donneur(5 semaines) Receveur (8-12 semaines)
Chlorhydrate de kétamine	injectable Hospira Inc.	NDC 0409-2053	Solution de stockage (50 mg/ml) Solution de travail (5 mg/ml)
Solution stérile de xylazine	Lloyd Inc.	NADA# 139-236	Solution de stockage (100 mg/ml) Solution de travail (1 mg/ml)
Ketoprofène	Fort Dodge Animal Health	NDC 0856-4396-01	Solution de stockage (100 mg/ml) Solution de travail orale (0,027 mg/ml)
Héparine sagent	savant pharmaceutique	NDC 25021-400	Solution de stockage (1000 U/ml) Solution de travail (100 U/ml)
Solution saline (stérile 0,9 % Chlorure de sodium)	CareFusion	AL4109
0,9 % Chlorure de sodium injectable	Hospira Inc.	NDC 0409-4888-10	Pour préparer l’anesthésique
Vaseline Pommade ophtalmique	Dechra Veterinary Products	NDC 17033-211-38
Iode Prep Pads	Triad Disposables, Inc.	NDC 50730-3201-1
Tampons de préparation à l’alcool	McKesson Corp.	NDC 68599-5805-1
Microscope	Leica	MZ95
Micro Ciseaux	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5693
Ciseaux à ressort	F.S.T	15009-08	Pour transecter l’aorte du donneur ou du receveur
Ciseaux extra étroits	F.S.T	14088-10
Porte-aiguille/Pince	MICRINS	MI1542	Pour tenir l’aiguille
Pince	fine F.S.T	11254-20
Pince	F.S.T	11251-35
Pince à motif standard	F.S.T	11000-12
Pince	F.S.T	13011-12
LANCASTER Eye Speculum	Zepf Medical Instruments	42-1209-07
Micro Vascular Clip	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-6472
Micro clip Pince d’application avec serrure	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5440
Suture monofilament en polyamide noir	AROSurgical Instruments Corporation	Suture #T4A10Q07	10-0, aiguille=70 microns
Suture en nylon monofilament noir	(Covidien)	SN-1956	Suture 6-0
Non-tissé Songes	McKesson Corp.	Réapprovisionnement N° 94442000
Seringue 1 ml	BD	REF 309659
Seringue	3 ml BD	REF 309657
10 ml Seringue	BD	REF 309604
18G 1 1/2, Aiguille hypodermique	BD	REF 305196
25G 7/8, Aiguille hypodermique	BD	REF 305124
27G 1/2, Aiguille hypodermique	BD	REF 305109
30G 1/2, Aiguille Hypodermique	BD	REF 305106
Coussin de Cœur	Sunbeam	Z-1228-001
Tondeuse	Wahl	9854-500
Table 2. Réactifs et équipements spécifiques.