Parabiose chez la souris: un protocole détaillé

Résumé

Parabiotic jonction de deux organismes entraîne le développement d'un système de circulation commun. Dans ce protocole, nous décrivons les étapes chirurgicales pour former une connexion entre parabiotic une souris de type sauvage et une souris exprimant la GFP constitutive.

Résumé

Parabiose est une union chirurgicale de deux organismes permettant le partage de la circulation sanguine. Fixation de la peau de deux animaux favorise la formation de microvaisseaux au niveau du site de l'inflammation. Partenaires Parabiotic partagent leurs antigènes circulants et sont donc libres de la réaction immunitaire indésirable. D'abord décrit par Paul Bert en 1864 ^1, la chirurgie parabiose a été affinée par Bunster et Meyer en 1933 pour améliorer la survie des animaux ^2. Dans le protocole courant, deux souris sont joints par voie chirurgicale suite à une modification de la technique et Bunster Meyer. Les animaux sont reliés par des articulations du coude et du genou, suivie par la fixation de la peau permettant un soutien ferme qui empêche de pression sur la peau suturée. Ici, nous décrivons en détail la parabiotic assemblage d'un GFP omniprésent exprimant la souris à un type sauvage (WT) de la souris. Deux semaines après l'intervention, la paire est séparée et les cellules positives à la GFP peut être détectée par analyse par cytométrie de flux circulant dans le sangion de la souris WT. Le chimérisme de sang permet d'examiner la contribution des cellules circulantes d'un animal à l'autre.

Introduction

Parabiose, rejoindre le chirurgicale de deux organismes, a été décrite pour la première en 1864 par Paul Bert comme un moyen de développer un modèle pour étudier les systèmes circulatoires partagées et composée de l'assemblage de la peau et des parois musculaires de deux rats ^1. Parabiose favorise la formation de microvaisseaux au niveau du site de l'inflammation et ³ a eu de nombreuses applications dans des études physiologiques, telles que la communication entre hormonal de la glande pituitaire et les gonades, ainsi que le rôle de l'hypertension rénale chez ^4. Il a été en outre utilisé pour étudier le recrutement et l....

Protocole

Toutes les études sur les animaux ont été réalisés selon les directives de protection des animaux et l'utilisation du comité de l'UCLA et les National Institutes of Health Guide pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire. La durée de la procédure décrite ci-dessous est d'environ 45 à 60 min, du début à la fin.

Une. Préparation du champ opératoire

1. Exécuter la procédure dans une salle de chirurgie des animaux propres.
2. Équipement: isoflurane vaporisateur, Gaymer T Pompe avec coussin chauffant.
3. Outils stériles: deux pinces, ciseaux courbes fines, porte-aiguille.
4. Des gants ....

Résultats

Le résultat attendu de parabiose de deux organismes est la contribution égale de système circulatoire de chaque animal à une circulation sanguine commune (Figure 2). On peut facilement vérifier le succès de l'équilibration du sang de l'parabiosed des souris WT et positif GFP par analyse par cytométrie de flux. Ici, le sang veineux a été obtenue à partir des queues des deux parabionts à 2 semaines après l'intervention chirurgicale et a été fractionné pour les cellules du sang périphérique (po.......

Discussion

La méthode de parabiose discuté ici présente des difficultés et des résultats techniques minimales des taux de mortalité faibles. La fixation des articulations du genou et du coude constitue une amélioration importante de la technique et Bunster Meyer. Toutefois, la procédure invasive reste donc le maintien de conditions stériles pendant toute la chirurgie est impérative. Pour prévenir l'infection du site chirurgical, il est important que les animaux reçoivent parabiosed une combinaison d'antibiotiques et être c.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Isoflurane-Phoenix	Clipper	NDC 57319-559-06
Chambre d’induction Posi-Seal	Produits d’imagerie moléculaire	AS-01-0530-SM
Système d’anesthésie portable	Produits d’imagerie moléculaire	AS-01-0007
Pompe Gaymer T	Gaymar Industries, Inc	TP650
Couverture chauffante (coussin chauffant)	Kent Scientific Corp	TP-22G
Pince courbe	Roboz	RS-5101
Ciseaux	Outils de science fine (FST)	FST 14063-09
Porte-aiguille	FST	FST 12501-13
Rasoir électrique	Oster	Golden A5