Très Résolu microscopie intravitale Striped-éclairage de centres germinaux

Zoltan Cseresnyes; Laura Oehme; Volker Andresen; Anje Sporbert; Anja E. Hauser; Raluca Niesner

doi:10.3791/51135

Article de méthode

Très Résolu microscopie intravitale Striped-éclairage de centres germinaux

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DOI :

10.3791/51135

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9 avril 2014

Zoltan Cseresnyes^*¹^,² , Laura Oehme^*³ , Volker Andresen⁴ , Anje Sporbert² , Anja E. Hauser^*³^,⁵ , Raluca Niesner^*¹

¹Biophysical Analytics, German Rheumatism Research Center, Leibniz Institute, ²Microscopy Core Facility, Max-Delbrück Center for Molecular Medicine, ³Immunodynamics, German Rheumatism Research Center, Leibniz Institute, ⁴LaVision Biotec GmbH, ⁵Immunodynamics and Intravital Imaging, Charité - University of Medicine

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Haute résolution intravitale imagerie avec un contraste accru jusqu'à 120 um de profondeur dans les ganglions lymphatiques de la souris adulte est obtenue en modulant spatialement le modèle d'excitation d'un multi-focal microscope à deux photons. En 100 profondeur pm nous avons mesuré des résolutions de 487 nm (latéraux) et 551 nm (axial), contournant ainsi les limites de diffusion et de diffraction.

Résumé

Suivi communication cellulaire par intravitale profond des tissus multi-microscopie biphotonique est la clé pour comprendre le destin des cellules immunitaires dans les échantillons de tissus et d'organes d'épaisseur dans la santé et la maladie. En contrôlant le motif de balayage dans la microscopie multi-photons et en appliquant des algorithmes numériques appropriés, nous avons développé une approche rayé-illumination, ce qui nous a permis d'atteindre trois fois meilleure résolution axiale et une amélioration de rapport signal sur bruit, c'est à dire l'inverse, en plus de profondeur de 100 um de tissu dans le tissu des organes lymphoïdes haute diffusion par rapport à la microscopie multi-photons standard. La vitesse d'acquisition ainsi que photoblanchiment et le photovieillissement effets sont similaires à la technique à base de photo-multiplicateur-standard, tandis que la profondeur d'imagerie a été légèrement inférieure en raison de l'utilisation de détecteurs de champ. En utilisant l'approche-éclairage rayé, nous sommes en mesure d'observer la dynamique des dépôts de complexes immuns sur les cellules dendritiques folliculaires secondaires ̵1; au niveau de quelques molécules de protéines dans les centres germinatifs.

Introduction

Deux photons laser microscopie (TPLSM), avec ses avantages pour l'imagerie des tissus profonds liés à infrarouge ultra-courte excitation pulsée ^1, a révolutionné notre point de vue sur les processus vitaux sur un seul niveau cellulaire en révélant la motilité et l'interaction de divers modèles sous-ensembles de cellules dans des animaux vivants ^5.2. Cependant, la technologie actuelle est encore insuffisant pour élucider les mécanismes de fonctionnement des organes et le dysfonctionnement comme une condition préalable pour le développement de nouvelles stratégies thérapeutiques, car il ne rend rares informations sur les bases moléculaires....