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Cellules souches et progénitrices neurales sont présentes tout au long du mammifère CNS 1, 2. Leur nature et les propriétés dans les zones germinales embryonnaires et adultes entourant les régions ventriculaires du cerveau et de la moelle épinière ont été largement documentés dans la dernière décennie 1-3. En grande partie, cela est dû au développement d'outils génétiques de plus en plus précises, telles que le système nerveux spécifique recombinaison Cre des allèles floxé ou lignée rétroviral traçage 4. Toutefois, une région-l'ancêtre géniteur de surface pial zone-a récemment été décrite en détail 5-7 et attend examen complet.
La surface piale du cerveau est définie comme l'interface entre la surface du cerveau et des méninges entourant 8. Au cours du développement, neuro et, plus tard, radiaux gliales pieds finaux attachent à cette surface 9,10. Certains des sapinsst neurones dans le cerveau humain et de nombreux mitoses neuronales sont observés dans cette région 11. Plus tard, au cours de la neurogenèse embryonnaire, les interneurones corticaux sont connus pour traverser la région pial, en plus de leurs routes migratoires dans la zone intermédiaire et la zone sous-ventriculaire 12-14. Pendant cette période, les cellules souches peuvent être cultivées à partir de cette zone et il semble être un site actif de la neuro-et gliogénèse 5. Dans le cerveau adulte, il a été rapporté que les interneurones peuvent être nés à partir de progéniteurs de surface piales après la provocation hypoxique 7. Toutefois, la contribution de cette région à son à genensis cours du développement embryonnaire et postnatal est restée obscure en partie en raison de la difficulté d'enquêter spécifiquement cette région 6. Dans le colliculus supérieur et dans le cortex cérébral, les interneurones superficielles (couche I ou dans le cortex) peuvent moduler la sortie du circuit de populations de neurones excitateurs sous-jacentes et de contribuer ainsi significantly à la fonction de ces structures. En particulier, la couche 1 interneurones sont en position privilégiée pour réguler la décharge des neurones à travers les couches supérieures du cortex cérébral en raison de leur connectivité étendue aux couches superficielles et profondes de colonnes corticales 15,16. D'une manière similaire, les interneurones horizontales reçoivent entrée excitatrice à partir de fibres corticales et de la rétine, projet sur une zone relativement large et sont spéculé à la médiation inhibition de populations neuronales répondant aux stimuli visuels à distance 17,18. En outre, leur morphologie est bien adapté à jouer un rôle potentiel dans l'activité d'onde motifs dans le système visuel en développement 19. Fait intéressant, le développement des interneurones et la maturation se produit dans une large mesure après la naissance. En outre, ce processus de maturation a été trouvé à être réglementées par l'activité neuronale et est donc un substrat de la plasticité du développement avec des conséquences pour la vie sur la fonction de circuit 20,21. Notamment, no promoteurs sont décrits qui peuvent cibler spécifiquement ces cellules transgénique. Progéniteurs de division peuvent être ciblées avec rétrovirus 7 mais la production de virus est longue et requiert des compétences pour obtenir les titres élevés nécessaires pour la transduction cellulaire.
L'électroporation a conduit à une renaissance de l'étude de développement neurologique, car elle permet l'interrogation génétique rapide et efficace des voies de signalisation dans progéniteurs neuronaux 4, 22, 23. L'électroporation implique l'injection d'ADN de plasmide, suivie par l'envoi d'impulsions électriques à l'extérieur de la tête, à conduire de manière unidirectionnelle de l'ADN dans les progéniteurs proliférant entourant les ventricules 4, 22, 23. L'électroporation semble exiger transit à travers les cellules de la phase M du cycle cellulaire pour l'expression de transgènes plasmidiques 24. Plus précisément, il a été trouvé que seulsles cellules passant à travers l'intérieur de la phase M 8 h d'électroporation de plasmides vont exprimer des transgènes malgré une livraison efficace de toutes les cellules à l'intérieur de ~ 160 um de la paroi ventriculaire 24. On suppose que cela est dû à la nécessité d'une rupture de l'enveloppe nucléaire en permettant un accès nucléaire des plasmides épisomiques, en tant que produits chimiques provoquant la perméabilisation nucléaire peuvent induire l'expression de plasmides dans des cellules post-mitotiques 25. Oeuvre à l'origine dans l'embryon 22, l'électroporation a été adapté pour une utilisation dans le cerveau post-natal beaucoup plus tard 26, 27. Récemment, nous avons adapté électroporation pour une utilisation dans la manipulation génétique des progéniteurs de surface piales 6. En outre, en utilisant cette approche, nous avons montré qu'il existe apparemment deux lignées distinctes de progéniteurs dans cette région et astrocytaire interneuronale-6. Ce protocole détaille un moyen simple, rapide et puissant pour cibler ces cellules pour l'interrogatoirele développement de mécanismes de réglage de ces cellules.