Guidée par échographie transthoracique intramyocardique injection chez la souris

Résumé

Injection intra-myocardique percutanée guidée par échocardiographie représente une modalité efficace, fiable, précis et efficaces pour la livraison de gènes agents de transfert ou de cellules dans le cœur murin. En suivant les étapes décrites dans le présent protocole, l'opérateur peut rapidement devenir compétent dans cette technique polyvalent, minimalement invasive.

Résumé

Les modèles murins de maladies cardio-vasculaires sont importants pour l'enquête mécanismes physiopathologiques et explorer les thérapies régénératives potentiels. Les expériences impliquant l'injection du myocarde sont actuellement effectuées par l'accès chirurgical direct par une thoracotomie. Bien commode lorsqu'il est effectué à un autre moment de la manipulation expérimentale telle que la ligature de l'artère coronaire, la nécessité d'une procédure invasive pour la livraison intramyocardique limite modèles expérimentaux possibles. Avec toujours améliorer la résolution de l'échographie et avancées techniques d'imagerie non invasives, il est maintenant possible d'effectuer systématiquement guidée par échographie, l'injection intra-myocardique percutanée. Cette modalité efficace et fiable offre les agents à une région ciblée du myocarde. Les avantages de cette technique sont la prévention de la morbidité chirurgicale, la possibilité de cibler les régions du myocarde sélectivement sous guidage échographique, et la possibilité de livrer à injecter de la myocardium à plusieurs intervalles de temps prédéterminés,. Avec une technique pratiquée, les complications de l'injection intra-myocardique sont rares, et les souris revenir rapidement à une activité normale sur la récupération de l'anesthésie. En suivant les étapes décrites dans le présent protocole, l'opérateur avec une expérience de base de l'échocardiographie peut rapidement devenir compétent dans cette technique polyvalent, minimalement invasive.

Introduction

Les maladies cardiaques sont la principale cause de décès chez les hommes et les femmes aux États-Unis, ce qui représente 600 000 décès par an ^1. Les modèles murins de maladies cardio-vasculaires sont très importantes pour l'enquête mécanismes physiopathologiques et pour explorer des thérapies potentielles. Livraison du myocarde de vecteurs de thérapie génique, cellules souches, des ARN modifiés, et d'autres agents thérapeutiques permis enquête de leur potentiel thérapeutique pour les maladies cardiaques ^2-7. Actuellement, il existe peu d'options pour la livraison du myocarde d'agents thérapeutiques dans des modèles de souris

Protocole

Toutes les étapes décrites ont été réalisées selon des protocoles approuvés par le soin et l'utilisation des animaux Commission institutionnelle de l'Hôpital pour enfants de Boston.

1 Préparation

1. Faire une analyse anatomique et fonctionnelle cardiaque initiale par échocardiographie avant le début du protocole d'injection, comme la position de la sonde fixe optimale pour l'injection intra-myocardique peut ne pas donner les vues standard optimales pour délimiter l'anatomie et l'évaluation de la fonction.
2. La configuration de l'injection est représentée sur les figures 1A-1C. P....

Résultats

Injection intra-myocardique murin de bleu de méthylène ou des microsphères fluorescentes

L'injection de colorant bleu Evans est utile à des fins de formation. Peu après l'injection, l'euthanasie la souris et enlever le coeur de visualiser la localisation du colorant bleu injecté. Figure 5 montre un exemple d'une injection réussie, avec un colorant bleu d'infiltration du myocarde au niveau du muscle mi-papillaire (figure 5A, dans la région en.......

Discussion

Biologiques peuvent être livrés au myocarde par injection directe intramyocardique, injection intrapéricardique, ou l'administration indirecte via la circulation sanguine. Cellulaires récents essais de thérapie dans les modèles d'infarctus du myocarde ont décrit une approche de thoracotomie ouverte à la prestation de injectat ^12-14. Un facteur important dans le succès d'une intervention thérapeutique infarctus repose sur le choix de la voie d'accouchement. La dose la plus élevée locale de biol.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Système d’imagerie à ultrasons Vevo 2100	Visualsonics
Vevo Integrated Rail System III	Sonde Visualsonics
Microscan MS400	Sonde Visualsonics
Microscan MS550D	Aiguilles Visualsonics
PrecisionGlide	BD	305128	30 G x 1 po/2,5 cm
1 cc seringue à embout coulissant	Exel International  ;	26048	ou équivalent
Gastight 50 μ ; l seringues en verre	Hamilton	1705
Trypan blue tache (0,4 %)	Gibco  ;	15250	ou équivalent
Isoflurane	Baxter	AHN3640	ou équivalent
Aquasonic 100	Parker Laboratories	(01-08)	ou équivalent
Microsphères de polystyrène (fluorescentes rouges)	Life Technologies	F-8842	ou équivalent