Pour améliorer notre connaissance de la formation néo-tissu cellulaire et moléculaire, un modèle murin de la TEVG a été récemment mis au point. Les greffons ont été implantés en sous-rénaux des greffes de la veine cave d'interposition de souris C57BL / 6. Ce modèle permet d'obtenir des résultats similaires à ceux obtenus dans notre étude clinique, mais sur un temps bien sûr beaucoup plus courte.
Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.
Article de méthode
Implantation de veine cave inférieure interposition de greffe en modèle de souris
Dans cet article
Résumé
Résumé
Échafaudages biodégradables ensemencées avec des cellules mononucléées de la moelle osseuse (BMC) sont souvent utilisés pour la chirurgie reconstructive pour traiter les anomalies cardiaques congénitales. Les résultats cliniques à long terme ont montré d'excellents taux de perméabilité, cependant, avec une incidence significative de la sténose. Pour étudier les mécanismes cellulaires et moléculaires de la formation néo-tissu vasculaire et de prévenir le développement de la sténose dans l'ingénierie tissulaire greffons vasculaires (TEVGs), nous avons développé un modèle de souris de la greffe d'environ 1 mm de diamètre intérieur. Tout d'abord, les TEVGs ont été assemblés à partir d'échafaudages tubulaires biodégradables fabriqués à partir d'un non-tissé d'acide glycolique sentir maille enduit de copolymère ε-caprolactone et L-lactide. Les échafaudages ont ensuite été placés dans un lyophilisateur, l'aspirateur pendant 24 heures, et stockés dans un dessiccateur jusqu'à ce que l'ensemencement des cellules. Deuxièmement, la moelle osseuse a été recueillie à partir de souris donneuses et des cellules mononucléées ont été isolées par centrifugation en gradient de densité. Troisièmement, environ un million de cellules ont étéensemencées sur un échafaudage et incubées O / N. Enfin, les échafaudages graines ont ensuite été implantés en sous-rénaux greffes veine cave d'interposition dans C57BL / 6. Les greffons implantés démontré une excellente perméabilité (> 90%) sans preuve de complications thrombo-emboliques ou la formation d'anévrisme. Ce modèle murin nous aidera à comprendre et quantifier les mécanismes cellulaires et moléculaires de la formation néo-tissu dans le TEVG.
Introduction
Les malformations cardiaques congénitales sont des affections graves qui touchent près de 8% des naissances vivantes aux États-Unis. Environ 25% de ces enfants atteints de malformations cardiaques congénitales ou 2,4 pour 1 000 naissances vivantes, nécessitent un traitement invasif dans la première année de leur vie 1. Le traitement le plus efficace pour une maladie cardiaque congénitale est la chirurgie reconstructive. Malheureusement, les complications résultant de l'utilisation de conduits vasculaires actuellement disponibles sont la cause la plus importante de la morbidité et de la mortalité post-opératoire.
Pour résoud....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Protocole
NOTE: Toutes les procédures d'animaux ont été approuvés par le Comité institutionnel Hôpital soin et l'utilisation des animaux de la Nationwide Children.
1. Fabrication de greffe
- Ajoutez la solution de ε-caprolactone et de L-lactide copolymère P (LA / CL) en ajoutant 100 mg de P (LA / CL) dans 2 ml de dioxane sous une hotte de laboratoire. Placer la solution sur un vortex et mélanger pendant 1-1,5 heures pour dissoudre complètement.
- Dans le même temps, retirer une feuille de l'acide glycolique (PGA) estime du congélateur et découpez plusieurs sections 5 x 8 mm. Également couper la pointe d'un pi pipett....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Résultats
Un schéma de TEVG implantation est représenté sur la figure 1. Moelle osseuse a été récoltée à partir d'une souris donneuse et des cellules mononucléaires ont été isolées par centrifugation de densité, puis ensemencées sur un échafaudage biodégradable. Les échafaudages ensemencées ont été incubées O / N et implantés à une souris receveuse comme une cave greffe d'interposition de la veine cave inférieure.
La figure 2 illustre la microscopie électroniq.......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Discussion
Le modèle de souris de TEVG est un outil précieux pour étudier les mécanismes cellulaires et moléculaires de la formation néo-tissu et le développement de la sténose. La tête de série BM-MNC a été montré dans les deux images histologiques et SEM des cellules ensemencées sur la greffe 11. Efficacité cellule de semis a également été démontré en utilisant un test d'ADN 7. L'utilisation de ce système modèle, nous avons montré que l'ensemencement de cellules réduit l'incidence du dévelop.......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Déclarations de divulgation
Les auteurs n'ont rien à révéler.
Remerciements
Ce travail a été soutenu en partie par une subvention du NIH (RO1 HL098228) de CKB.
....Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Feutre d’acide polyglycolique (PGA) | Structures biomédicales Pointe | pipette commandée sur mesure | |
| , 0,1-10 &mu ; l ; | Fisher Sientific | 02-707-456 | |
| Lyophilisateur ; | Labconco | 7070020 | |
| RPMI medium 1604 | Gibco | 11875-093 | |
| Boîte de Pétri | BD | 353003 | |
| plaque 24 puits | Corning | 3526 | |
| 15 cc tube ; | BD | 352096 | |
| Ficoll | Sigma | 10831-100ml | Aussi appelé 'Histopaque’DPBS |
| Gibco | 14190-144 | ||
| Coupe-os Littauer 4.5 » Straight | Roboz | RS-8480 | Pour pince de récolte BM |
| 4.5" | Roboz | RS-8120 | Pour Ciseaux de récolte BM |
| 4.5" | Roboz | RS-5912 | Pour la récolte BM |
| Microscope | Leica | M80 | |
| C57BL/6J (H-2b), Female | Jackson Laboratories | 664 | 8-12 semaines Injection de |
| chlorhydrate de kétamine | Hospira Inc. | NDC 0409-2053 | |
| Solution stérile de xylazine | Akorn Inc. | NADA# 139-236 | |
| Kétoprofène | Fort Dodge Santé animale | NDC 0856-4396-01 | |
| Ibuprofène | PrecisionDose | NDC 68094-494-59 | |
| Héparine | sodique Sagent Pharmaceticals | NDC 25021-400 | |
| Solution saline (chlorure de sodium stérile à 0,9 %) | Hospira Inc. | NDC 0409-0138-22 | |
| Chlorure de sodium injectable à 0,9 % | Hospira Inc. | NDC 0409-4888-10 | |
| Pommade ophtalmique à la vaseline | Dechra Veterinary Products | NDC 17033-211-38 | |
| Tampons de préparation à l’iode | Triad Disposables, Inc. | NDC 50730-3201-1 | |
| Tampons de préparation à l’alcool | McKesson Corp. | NDC 68599-5805-1 | |
| Applicateurs à embout en coton | Fisher Scientific | 23-400-118 | |
| Ciseaux fins | FST | 14028-10 | |
| Pince à micro-adson | FST | 11018-12 | |
| Pince à pince | FST | 00072-14 | |
| S& T Pince vasculaire | FST | 00396-01 | |
| Ciseaux à ressort | FST | 15008-08 | |
| Écarteurs Colibri FST | 17000-04 | ||
| Dumont #5 pince | FST | 11251-20 | |
| Dumont #7 - pince fine | FST | 11274-20 | |
| Dumont #5/45 pince | FST | 11251-35 | |
| Porte-aiguille Tish/ Pince | Micrins | MI1540 | |
| Suture monofilament polyamide noir, 10-0 | AROSurgical Instruments Corporation | TI638402 | Pour suturer le greffon |
| Suture monofilament polyamide noir, 6-0 | AROSurgical Instruments | SN-1956 | Pour la musculature et la fermeture de la peau |
| Éponges non tissées | McKesson Corp. | 94442000 | |
| Hémostat résorbable | Ethicon | 1961 | |
| ml Seringue | BD | 309659 | |
| 3 ml Seringue | BD | 309657 | |
| 10 ml 309604 | |||
| 18 G 1,5 po, Aiguille | BD | 305190 | |
| 25 G 1 po, Aiguille | BD | 305125 | |
| 30 G 1 po, Aiguille | BD | 305106 | |
| Recirculateur d’eau chaude | Gaymar | TP-700 | |
| Coussin chauffant | Gaymar | TP-22G | |
| Tondeuse | Wahl | 9854-500 |
Références
- Heart Association, A. merican Heart Disease and Stroke Statistics—2012 Update. Circulation. 125, (2012).
- Shinoka, T., et al. Creation Of Viable Pulmonary Artery Autografts Through Tissue Engineering. The Journal of Thoracic and Cardiov....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Réimpressions et autorisations
Explorer plus d’articles
Greffon Vasculaire d'Ingénierie TissulaireCellules Mononucléées de la Moelle OsseuseCentrifugation par Gradient de DensitéImplantation dans la Veine Cave InférieureFabrication de Supports BiodégradablesProtocole d'Ensemencement CellulaireTechniques de MicrochirurgieAnalyse HistologiqueFormation de Néo-tissuPrévention de la Sténose
