Appartement Mont imagerie de la peau de souris et son application à l'analyse des follicules pileux Modélisation et sensorielle Axon Morphologie

Résumé

La peau des mammifères contient un large éventail de structures - comme les follicules pileux et les terminaisons nerveuses - qui présentent des modèles distinctifs de l'organisation spatiale. Analyser la peau comme un support plat profite de la géométrie à 2 dimensions de ce tissu pour produire toute l'épaisseur des images haute résolution des structures de la peau.

Résumé

La peau est un tissu très hétérogène. Structures intra-dermiques comprennent les follicules pileux, les muscles arrector de pili, spécialisations épidermiques (tels que des amas de cellules de Merkel), les glandes sébacées, les nerfs et les terminaisons nerveuses, et des capillaires. La disposition spatiale de ces structures est étroitement contrôlée à l'échelle microscopique - comme on le voit, par exemple, dans l'agencement ordonné des types de cellules au sein d'un seul follicule de cheveux - et à l'échelle macroscopique - comme on le voit par les orientations presque identiques de milliers de cheveux follicules au sein d'une région locale de la peau. Visualiser ces structures sans sectionnement physiquement la peau est possible en raison de la géométrie à 2 dimensions de cet organe. Dans ce protocole, nous montrons que la peau de la souris peut être disséqué, fixées, perméabilisées, coloré, et a précisé que l'objet de deux dimensions intact, un montage plat. Le protocole permet de visualiser facilement les structures de la peau dans leur totalité à travers toute l'épaisseur de grandes surfaces de peau par optsectionnement ical et la reconstruction. Les images de ces structures peuvent également être intégrés avec des informations sur la position et l'orientation par rapport aux axes du corps.

Introduction

La peau est l'un des organes les plus importants dans le corps, avec des fonctions importantes dans somato-sensation, isolation / thermorégulation, et la défense immunitaire ^1. Comprendre les bases moléculaires et cellulaires du développement et de la fonction peau a été de longue date un intérêt en raison de l'importance fondamentale de la peau comme un système biologique et sa pertinence pour la dermatologie. La peau des mammifères contient une variété de structures multicellulaires, y compris les couches stratifiées de kératinocytes, du tissu conjonctif dermique, plusieurs types de follicules pileux, les glandes sébacées, les muscles arrector de....

Protocole

Cette étude a été réalisée en stricte conformité avec les recommandations du Guide pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire des National Institutes of Health. Tous les animaux ont été traités selon approuvé protection des animaux et l'utilisation comité (IACUC) protocole MO11M29 des Johns Hopkins Medical Institutions. Consultez vos directives locales du Comité de protection et d'utilisation des animaux institutionnels pour les méthodes d'euthanasie approuvées. Porter des gants, une blouse de laboratoire et des lunettes de sécurité lors de la manipulation des fixateurs d'aldéhydes ou des solvants organiques.

Résultats

imagerie de fond clair de flatmounts de la peau peut être utilisée pour l'image afférences sensorielles cutanées (figure 3A) et ¹⁰ modèles de follicules pileux sur la base de pigmentation mélanique (Figure 4). L'imagerie confocale d'flatmounts de la peau peut être utilisée pour définir la géométrie de (1) des agrégats de cellules Merkel, visualisées avec un anticorps anti-cytokératine-6 ​​ou à l'absorption AM de teinture (figures 3I-L), (2) le.......

Discussion

Maîtrise des méthodes de dissection décrites ci-dessus ne nécessite patience, d'une main ferme, et quelques bons outils de dissection. La dissection de la peau dorsale est relativement facile, mais la queue et la peau de pied dissections - en particulier aux âges postnatales - sont plus difficiles. Au début des âges prénatal (par exemple, avant E15), la peau est difficile à enlever sans le déchirer. Idéalement, pour de nombreuses études sur la croissance et la structuration des structures de la peau chez la.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
5-bromo-4-chloro-indolyl phosphate (BCIP)	Roche	11383221001
AM1-43	Biotium	70024
AM4-65	Biotium	70039
Alcool benzylique	Sigma	402834
Benzyl benzoate	Sigma  ;	B-6630
Microscope confocal	Zeiss	LSM700
Cy3-alpha anticorps anti-actine musculaire lisse	Sigma  ;	C6198	1:400
Cytokératine-8  ;	Etudes développementales Hybridoma Bank	TROMA-I-c	1:500
Microscope
Outils de dissection  ;	Fine Science Tools		ciseaux et pinces
Rasoir
Fluoromount G	EM Sciences	17984-25
Formalin	Sigma	HT501320
Plats en verre	Pyrex  ;		de 6 cm et 10 cm de diamètre
	Amersham Biosciences	SE202P-10	10 cm x 8 cm x 1 mm
Épilateur	Nair
Plate-forme tournante horizontale  ;	Hoefer	PR250 Vibrateur
Épingles à insectes	Fine Science Tools  ;	26002-20
Kétamine/xylazine	Sigma	K113
Nitroblue tétrazolium (NBT)	Roche  ;
huile rouge O	Sigma	O0625
Paraformaldéhyde	Sigma  ;	P6148
Lames de rasoir	VWR	55411-055
Anticorps secondaires  ;	Invitrogen		Alexa-dye conjugué  ;
Sylgard-184	Fisher Scientific	NC9020938
Boîtes			10 cm de diamètre
Plaques pour culture tissulaire	6 et 12 puits.

de dissectionélectrique Plaques de verre orbital11383213001 en plastique pour culture tissulaire