L'échantillonnage du sol et isolement de nématodes entomopathogènes (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

Résumé

Les nématodes entomopathogènes sont des vers ronds terricoles qui parasitent une grande variété d'insectes. Nous démontrons méthodes d'échantillonnage utilisées pour l'isolement de ces nématodes dans le sol au moyen de deux techniques: l'appâtage des insectes et le piège blanc modifié, pour la récupération des nématodes à partir d'échantillons de sol et de cadavres d'insectes infectés, respectivement.

Résumé

Les nématodes entomopathogènes (aka EPN) représentent un groupe de nématodes terricoles qui parasitent une grande variété d'insectes. Ces nématodes appartiennent à deux familles: Steinernematidae et Heterorhabditidae. Jusqu'à présent, plus de 70 espèces ont été décrites dans le Steinernematidae et il ya environ 20 espèces dans le Heterorhabditidae. Les nématodes ont un partenariat mutualiste avec des bactéries Enterobacteriaceae et ensemble, ils agissent comme un puissant complexe insecticide qui tue un grand nombre d'espèces d'insectes.

Ici, nous nous concentrons sur les techniques les plus courantes en considération pour la collecte de l'EPN du sol. La deuxième partie de cette présentation se concentre sur la technique de l'insecte-appâts, une approche largement utilisée pour l'isolement de l'EPN à partir d'échantillons de sol, et la technique de piège Blanc modifié qui est utilisé pour la récupération de ces nématodes des insectes infectés. Ces méthodes et ces techniques sont les principales étapes pour la mise en place réussie de l'EPN culteres dans le laboratoire et également former la base pour d'autres essais biologiques qui considèrent que ces nématodes comme organismes modèles pour la recherche dans d'autres disciplines biologiques. Les techniques présentées dans cette présentation correspondent à ceux exécutés et / ou conçu par les membres du SP Stock laboratoire ainsi que ceux décrits par différents auteurs.

Introduction

Beaucoup de nématodes sont associés avec des insectes, et leurs interactions hôte vont de bénéfique à préjudiciable. Ici, nous nous concentrons sur un groupe de nématodes qui sont des agents pathogènes d'insectes, aussi connu comme nématodes entomopathogènes (ou EPN). Deux familles de nématodes appartiennent à ce groupe de nematodes: Steinernematidae et Heterorhabditidae ^11,13. Leur effet pathogène est en effet conféré par leur interaction avec les bactéries entériques facultatives anaérobies (bactéries Xenorhabdus associent steinernematids et bactéries Photorhabdus associer à heterorhabditids) ^2. Les bactéries sont vectori....

Protocole

1. Sol de prélèvement des échantillons

1. Considérez couvrant une superficie minimale de 2 - 4 m ² pour chaque site d'échantillonnage.
2. Prélever des échantillons de sol à une profondeur d'au moins 15 cm (Figure 4).
3. Prenez au moins 5 échantillons aléatoires dans ce domaine.
4. Prendre 3 sous-échantillons par échantillon. Selon l'objectif de l'étude, soit combiner les sous-échantillons ou les garder séparés.
5. Placer chaque échantillon dans un sac en plastique. Considérez double ensachage pour éviter les fuites d'échantillons (Figure 4).
6. échantillons d&#....

Résultats

Sol de prélèvement des échantillons

Troisième stade juvéniles infectieux de l'EPN sont les seules étapes de vie libre dans le cycle de vie de ces nématodes qui se trouvent dans le sol (figure 1). Par conséquent, la collecte des échantillons de sol est une méthode très efficace pour récupérer de ces nématodes. Figure 4 montre un profil de sol indiquant la profondeur à laquelle les échantillons doivent être prises. La préservation de l'humidité d'un échantillo.......

Discussion

Cette démonstration est le premier des deux présentations qui décrivent un certain nombre de techniques qui sont couramment utilisés pour l'étude de l'EPN et de leurs bactéries symbiotiques. Ces techniques constituent des étapes clés de la mise en place réussie des cultures de l'EPN dans le laboratoire et constituent également la base pour d'autres essais biologiques qui emploient EPN comme organismes modèles pour la recherche.

Diverses études de sol de l'EPN ont montré q.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Galleria mellonella	Timberline	http://www.timberlinefisheries.com/ProductDetails.asp?ProductCode=WAXLG	Pour la technique d’appâtage des insectes
Papier filtre, 55 mm Cellulose grade 1	Whatman/VWR	28450-048	Chambre d’infection et piège blanc
60 x 15 mm Boîtes de Pétri	VWR	25384-092	Chambre d’infection et piège blanc
100 x 15 mm Boîtes de Pétri	VWR	25384-088	Chambre d’infection et piège blanc
Sacs en plastique ZIPloc	Ace Hardware ou quincaillerie		Prélèvement de sol Pipette
mécanique P1000, P200 ml	VWR	89130-562 ; 89130-566  ;	Chambre d’infection et ensemble piège blanc
Embouts Pippetor 1000ml, 200 ml	VWR	16466-004 ; 53510	Chambre d’infection et ensemble piège blanc
Bleach	Ace Quincaillerie ou quincaillerie		Prélèvement de sol , désinfection
Hypochlorite de sodium	Ace Quincaillerie ou quincaillerie		Prélèvement de sol , désinfection
70 % Ethyl alochol	AAPER	17212945	Prélèvement de sol , désinfection
Pelles	Ace Hardware ou quincaillerie locale	N/A	Échantillonnage de
sol Échantillonneur de sol tubulaire	Accuproducts		Échantillonnage de sol
Sonde de sol, manche long	Nupla  ;	PRB4T 69401 Classic	Échantillonnage de sol
Ruban à mesurer	Ace Hardware ou quincaillerie		Échantillonnage de sol
Ruban de signalisation, différentes couleurs	Ace Hardware ou quincaillerie		Échantillonnage de sol
Flacons de culture tissulaire	VWR	Falcon, 29185-304  ;	Piège blanc, collection d’EPN
Flacons de toilette, polyéthylène, col large	VWR	16650-107	Piège blanc, collection d’EPN

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