Os milieu conditionné: Préparation et essais biologiques

Summary

Nous décrivons ici comment préparer milieu de l'os de la climatisation (BCM) et de tester son activité in vitro.

Abstract

Greffes osseuses autologues sont largement utilisés dans la chirurgie orale et maxillo-faciale, orthopédie, traumatologie et. Greffes osseuses autologues ne remplacent pas seulement os manquant, ils soutiennent également le processus complexe de la régénération osseuse. Ce comportement favorable des autogreffes est attribuée aux trois caractéristiques: ostéoconductivité, osteogenicity et ostéoinductivité. Cependant, il est un autre aspect: Greffons osseux libérer une multitude de molécules, y compris les facteurs de croissance, qui peuvent cibler des cellules mésenchymateuses impliquées dans la régénération osseuse. Les propriétés paracrines des greffes osseuses peuvent être étudiés in vitro par l'utilisation du support d'os conditionné (BCM). Ici, nous présentons un protocole sur la façon de préparer le milieu de l'os cortical conditionné à partir natif de porc os et l'os qui a subi un traitement thermique ou déminéralisation. Les cellules peuvent être directement exposés à la BCM ou ensemencées sur les biomatériaux, tels que les membranes de collagène, préalablement trempées avec BCM. Nous donnons des exemples pour in vitro bioassays avec des cellules mésenchymateuses sur l'expression des gènes régulés par le TGF-β. Les protocoles présentés devraient inciter à révéler davantage les effets paracrines de greffes osseuses pendant la régénération osseuse et ouvrir un chemin pour la recherche translationnelle dans le vaste domaine de la chirurgie reconstructive.

Introduction

Osseuse autologue est largement utilisé pour combler les défauts qui ont eu lieu à la suite d'une malformation, une chirurgie d'exérèse, la chirurgie traumatologique reconstructive, et avant le placement de l'implant ^1,2. Comprendre les principes biologiques de la façon dont les greffons osseux soutenir le processus de consolidation de la greffe est non seulement la clé pour comprendre pourquoi autogreffes sont considérés comme l'étalon-or en chirurgie reconstructive, il est également bionique pour améliorer la conception des substituts osseux ^3. Pourtant, la consolidation de la greffe est plus rapide avec de l'os autologue p....

Protocol

1. Préparation BCM

1. Obtenir mandibules de porcs du boucher local aussi frais que possible. Placez les mandibules sur une surface ferme et libérer un lambeau de pleine épaisseur accordant une attention particulière à ne pas laisser tout tissu doux ou périoste fixé à l'os. Travailler dans un environnement propre, sans la nécessité de travailler sous la hotte à flux.
2. Une fois un lambeau de pleine épaisseur est libéré, utiliser un grattoir osseuse pour récolter les éclats d'os du côté buccal. S'il vous plaît noter que le grattoir osseuse doit être forte. Poignée fermement le grattoir osseuse et avec de longs mouvements recueillent l'os....

Results

Os milieu conditionné est préparé à partir de frites fraîches d'os de porc. Aperçu général du processus pour préparer BCM et à utiliser en combinaison avec des biomatériaux BCM est illustré à la figure 1 et la figure 2, respectivement. Lors de la préparation de la BCM, il est important d'obtenir de grandes éclats d'os avec de longs mouvements que les mouvements de courte durée ou de très petits éclats d'os peut affecter la qualité de la BCM finale. Qualité de BCM peut être contrôlée par.......

Discussion

Support d'os conditionné reflète l'activité libéré de greffons osseux au cours des premiers stades de la régénération osseuse. Le protocole décrit ici peut être adapté à étudier la réponse de différents types de cellules impliquées dans la régénération osseuse. En outre, le protocole peut être utilisé pour préparer un milieu conditionné à partir de transformés os ou des charges. Les méthodes sont faciles à réaliser et de compter sur un concept simple: les facteurs libérés à partir de divers os natif et traitées........

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Mandibules de porc	Grattoir à os Bucher
	Hu-Friedy	PPBUSE2/36
Antibiotiques & Antimicotiques	All life Technologies	15240-062
Membranes de collagène (Bio-Gide)	Geistlich
Sérum de veau fœtal	Invitrogen Corporation	16030074
DMEM	Invitrogen Corporation	21885-025
Kit d’isolement d’ARN hautement pur	Roche	11828665001
Transcriptor First Kit de synthèse d’ADNc	Roche	4379012001
Amorces	Microsynth
SYBR Vert (pour Q-RT-PCR)	Roche	4673484001
PBS	Roche	11666789001