Bactérienne Feuille Infiltration Essai de caractérisation fine des réponses de défense des plantes à l&#39;aide du<em&gt; Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae</em&gt; Pathosystème

Résumé

La quantification de la croissance des agents pathogènes est un outil puissant pour caractériser diverses réponses immunitaires d’Arabidopsis thaliana (ci-après : Arabidopsis). La méthode décrite ici présente un test d’infiltration à la seringue optimisé pour quantifier le Pseudomonas syringae pv. maculicola Croissance d’ES4326 dans les feuilles adultes d’Arabidopsis.

Résumé

En l'absence de cellules immunitaires mobiles spécialisées, les plantes utilisent leur mort cellulaire programmée localisée et systémique résistance acquise à se défendre contre les attaques de pathogènes. La contribution d'un gène d'Arabidopsis spécifique à la réponse immunitaire de l'installation globale peut être spécifiquement et évalué quantitativement par dosage de la croissance de l'agent pathogène dans le tissu infecté. Pendant plus de trois décennies, la bactérie hémibiotrophe Pseudomonas syringae pv. Maculicola ES4326 (PSM ES4326) a été largement appliquée comme le modèle pathogène pour étudier les mécanismes moléculaires sous-jacents de la réponse immunitaire Arabidopsis. Afin de fournir des agents pathogènes dans les tissus foliaires, de multiples méthodes de vaccination ont été mis en place, par exemple, une seringue infiltration, dip inoculation, pulvérisation, infiltration sous vide, et l'inoculation d'inondation. Le protocole suivant décrit une méthode d'infiltration seringue optimisé pour fournir virulente Psm ES4326 dans les feuilles de l'adultesol cultivé des plants d'Arabidopsis et l'écran avec précision pour une meilleure sensibilité à la maladie (EDS) en direction de cet agent pathogène. En outre, ce protocole peut être complétée avec de multiples pré-traitements pour disséquer défauts immunitaires spécifiques au sein des différentes couches de défense de la plante, y compris l'acide salicylique (SA) Immunité -Triggered (IST) et immunitaires MAMP-Triggered (MTI).

Introduction

En raison de leur nature sessiles, les plantes sont constamment menacés par une pléthore d'agents pathogènes présentant différents modes de vie et des stratégies nutritionnelles ^1. En première approximation, les agents pathogènes biotrophes maintiennent leur hôte vivante pour récupérer les nutriments, tandis que les agents pathogènes et les toxines nécrotrophes enzymes activement secrets pour tuer le tissu hôte et se nourrissent sur ​​les cellules mortes ^1. Un autre groupe d'agents pathogènes, hemibiotrophs appelés, commence leur cours de l'infection par le stade biotrophe et les changements à l'étape nécrotrophe après avoir atte....

Protocole

Le texte qui suit décrit un protocole par étapes à accomplir optimisé Psm ES4326 dosage seringue d'infiltration chez Arabidopsis. Les principales méthodes de ce test sont représentés dans un organigramme simplifié (figure 1).

1. Plante conditions de croissance

1. Semer des graines
   1. Préparez 2 pots (4 de diamètre, 3,75 en hauteur) remplis sans tasser avec le sol et l'eau des pots en les trempant du fond O / N avant de drainer l'excès d'eau.
   2. Semez les graines d'Arabidopsis 50-100, de type sauvage Col-0 ou npr1-1 mutantes, sur chaque pot avec une pliées 70 mm pe....

Résultats

Le protocole que nous décrivons ici représente un P. optimisé syringae essai seringue d'infiltration d'évaluer quantitativement la réponse immunitaire dans des plantes Arabidopsis. Comme illustré sur la figure 1, l'infiltration de la seringue de la MSP ES4326 est suivie par l'extraction et la quantification de l'agent pathogène par des dilutions en série et colonies énumération.

Comme décrit dans l'étape 3 dans le t.......

Discussion

Avec la diminution des terres agricoles disponibles et augmentation de la population, les chercheurs du monde entier sont mis au défi avec des besoins urgents pour l'amélioration des cultures. Le rendement peut être grandement influencée par divers stress biotiques et abiotiques. Parmi eux, une infection pathogène est l'une des principales causes de la baisse de rendement des cultures, responsable d'environ 12% de pertes dans les États-Unis seuls ^45. Pour résoudre ce problème, la recherche massive.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
MetroMix 360° ;	Grosouth	SNGMM360
Grands pots	Grosouth	TEKUVCC10TC
12 x 6 Inserts	Grosouth	LM1206
11x 21 Appartements sans trous	Grosouth	LM1020
11x 21 Appartements avec trous	Grosouth	LM1020H
Dômes de propagation en vinyle	Grosouth	CW-221
Proteose Peptone	Fisher Scientific	DF0122-17-4
Phosphate de potassium dibasique trihydraté	MP Biomedicals	151946
Agar  ;	Fisher Scientific	A360-500
Sulfate de streptomycine	Bio Basic Inc	SB0494
100 x 15 mm Boîtes de Pétri	Fisher Scientific	FB0875713
150 x 15 mm Boîtes de Pétri	Fisher Scientific	R80150
Plaque rectangulaire	Fisher Scientific	12-565-450  ;
MgCl2 Hexahydrate	Bio Basic Inc	MB0328
Glycérol	Bio Basic Inc	GB0232
MgSO4  ;	Bio Basic Inc	MN1988
Seringue de 1 ml	Fisher Scientific	NC9992493  ;
Kimwipe	Fisher Scientific	06-666-A
Tubes de broyage  ;	Denville Scientific	B1257
Capuchons pour tubes de broyage	Denville Scientific	B1254
Boule de broyage en acier inoxydable	Fisher Scientific	2150
Plaque à 96 puits  ;	Fisher Scientific	12-556-008
Salicylate	de sodium Sigma Aldrich	s3007-1kg
flg22 (QRLSTGSRINSAKDDAAGLQIA)	Genescript	Sur commande
elf18 (Ac-SKEKFERTKPHVNVGTIG)	Genescript	Sur commande
Perforatrice	Agrafes	146308
Biophotomètre plus	Eppendorf
Homogénéisateur à haut débit PowerGen	Fisher Scientific	02-215-503
Microcentrifugeuse à spin accu	Fisher Scientific	13-100-675
Pipette multicanaux (10-100 µ ; l)	Eppendorf	3122 000.043
Pipette multicanaux (30-300 µ ; l)	Eppendorf	3122 000.060
Pipette (20µ ; l)	Eppendorf	3120 000.038
Pointes de pipette	Fisher Scientific	3552-HR
Sharpie marqueur permanent	Agrafes	507130
Tube de 1,5 ml	Eppendorf	22363204
Pince	Fisher Scientific	08-890

952000006