Article de méthode

Application séquentielle de verre Lamelles pour évaluer la compression Rigidité de l'objectif de la souris: Strain et morphométriques Analyses

DOI :

10.3791/53986

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3 mai 2016

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1Department of Cell and Molecular Biology, The Scripps Research Institute

Dans cet article

Résumé

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L’augmentation de la rigidité du cristallin liée à l’âge est liée à la presbytie. Ce protocole décrit une méthode simple et économique pour mesurer la rigidité de l’objectif de la souris. Les lentilles de souris, comme les lentilles humaines, deviennent plus rigides avec l’âge. Cette méthode est précise et peut être adaptée aux objectifs d’animaux plus grands.

Résumé

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La lentille de l'œil est un organe transparent qui réfracte et se concentre la lumière pour former une image claire sur la rétine. Chez l'homme, les muscles ciliaires se contractent pour déformer la lentille, ce qui conduit à une augmentation de la puissance optique de la lentille de se concentrer sur des objets proches, un processus connu sous le nom d'hébergement. les changements liés à l'âge de la rigidité de la lentille ont été liés à la presbytie, une réduction de la lentille 'capacité à accueillir, et, par extension, le besoin de lunettes de lecture. Même si les lentilles de souris ne peuvent accueillir ou de développer la presbytie, des modèles de souris peuvent fournir un outil génétique inestimable pour la compréhension des pathologies de l'objectif, et le vieillissement accéléré observé chez la souris permet l'étude des changements liés à l'âge dans la lentille. Ce protocole présente un procédé simple, précise et économique pour la détermination de la rigidité de la lentille de la souris, en utilisant des lamelles de verre pour appliquer séquentiellement des charges de compression croissante sur la lentille. Les données représentatives confirment que les lentilles de souris deviennent plus rigide avec l'âge, commeLentilles humaines. Ce procédé est très reproductible et peut potentiellement être étendu par des moyens mécaniques des lentilles d'essai à partir des animaux plus gros.

Introduction

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Le cristallin est un organe transparent et avasculaire situé dans la chambre antérieure de l’œil qui est responsable de la focalisation fine de la lumière sur la rétine. Une membrane basale transparente, appelée capsule du cristallin, entoure une masse de cellules fibreuses allongées recouvertes d’une monocouche antérieure de cellules épithéliales1,2. La croissance tout au long de la vie du cristallin dépend de la prolifération et de la différenciation continues des cellules épithéliales à l’équateur du cristallin en nouvelles cellules fibreuses qui sont ajoutées aux générations précédentes de cellules fibreuses de manière concentrique2. Au fil d....

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Protocole

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Toutes les procédures animales ont été réalisées conformément aux recommandations du Guide pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire par les National Institutes of Health et en vertu d'un protocole approuvé par le Comité soin et l'utilisation institutionnelle des animaux à l'Institut de recherche Scripps.

1. Objectif Dissection

  1. Euthanasier souris selon les recommandations dans les National Institutes of Health "Guide pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire» et les protocoles d'utilisation institution d'animaux approuvés.
  2. Énucléer l'œil de souris à l'aide des pinces incurvées. Enfoncer l....

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Résultats

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La rigidité et les dimensions des lentilles de souris 2, 4 et 8-month-old ont été mesurés. Les souris étaient tous les animaux de type sauvage sur un pur souche C57BL6 fond obtenue à partir de l'élevage Facility IRST animaux, et chaque lentille a été chargé avec 1 à 10 lamelles. Les déformations axiales et équatoriales ont été calculées en fonction de la charge appliquée par mesure de la direction axiale et le diamètre equatorial de la lentille après l'addition de chaque lamelle couvre-o.......

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Discussion

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Il y a plusieurs considérations clés lors de l'utilisation de cette méthode pour mesurer la rigidité de la lentille. En premier lieu, les lamelles sont appliquées à la lentille à un angle légèrement oblique (8 à 8,5 °) par rapport au fond de la chambre (θ). Il en sera une très petite partie de la charge équatorial plutôt que axialement. Cependant, cette charge équatoriale est considéré comme négligeable parce que le péché θ ≈ 0,1 19. Si cette méthode est adaptée pour des lentilles plus grandes, l'angl.......

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Déclarations de divulgation

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Les auteurs n'ont rien à dévoiler.

Remerciements

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Ce travail a été soutenu par la subvention R01 EY017724 (VMF) du National Eye Institute et la subvention K99 AR066534 (DSG) de l’Institut national de l’arthrite et des maladies musculo-squelettiques et cutanées.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Pince droite à pointe fineOutils scientifiques fins11252-40
Ciseaux de microdissection, bord droitOutils scientifiques fins15000-00
Pince courbeOutils scientifiques fins11272-40
Pince à saisirHammacherHSC 702-93Plat de
dissectionFisher Scientific12565154
Boîte de Pétri de 60 mmFisher Scientific0875713A
1x solution saline tamponnée au phosphate (PBS)Life Technologies14190
18 x 18 mm lamelles en verreFisher Scientific12-542A
Chambre de mesure avec divots pour maintenir les lentillesSur mesure (voir Figure 1)
Miroir à angle droitEdmund Optics45-591
Source lumineuseSchott/Fostec8375
Microscope à dissection éclairéOlympusSZX-ILLD100avec phototube SZ-PT
Appareil photo numériqueNikonCoolpix 990
en option

Références

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  1. Lovicu, F. J., Robinson, M. L. Development of the ocular lens. , Cambridge University Press. (2004).
  2. Piatigorsky, J. Lens differentiation in vertebrates. A review of cellular and molecular features. Differentiation. 19 (3), 134-153 (1981).
  3. Glasser, A.

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Mots-clés

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