Une méthode efficace pour obtenir des cellules dédifférenciées Fat

Résumé

Nous avons modifié les conditions de génération des cellules DFAT et fournissons ici des informations concernant l’utilisation d’un milieu de croissance amélioré pour la production de ces cellules.

Résumé

L'ingénierie tissulaire et la thérapie cellulaire sont très prometteurs cliniquement. À cet égard, des cellules pluripotentes, telles que des cellules souches mésenchymateuses (MSC) peuvent être utilisés en thérapeutique, dans un avenir proche, pour restaurer la fonction des organes endommagés. Néanmoins, plusieurs questions techniques, y compris la procédure très envahissante d'isoler MSCs et l'inefficacité entourant leur amplification, entravent actuellement l'utilisation clinique potentielle de ces modalités thérapeutiques. Ici, nous introduisons une méthode très efficace pour la production de cellules graisseuses dédifférenciées (DFAT), les cellules MSC-like. Fait intéressant, les cellules peuvent être différenciées DFAT en plusieurs types cellulaires incluant adipogène, osteogene et les cellules chondrogéniques. Bien que d'autres groupes ont déjà présenté différentes méthodes pour générer des cellules DFAT du tissu adipeux mature, notre méthode nous permet de produire des cellules DFAT plus efficacement. À cet égard, nous démontrons que le milieu de culture DFAT (DCM), supplémenté avec 20% de FBS,est plus efficace pour générer des cellules DFAT que DMEM, supplémenté avec 20% de FBS. En outre, les cellules DFAT produites par notre procédé de culture cellulaire peuvent être redifférenciés dans plusieurs types de tissus. En tant que tel, un modèle très intéressant et utile pour l'étude de la dédifférenciation du tissu est présenté.

Introduction

La thérapie cellulaire et l' ingénierie tissulaire sont des sujets brûlants dans le domaine de la médecine régénérative ^1-5. Bien que ces modalités thérapeutiques très prometteuses, plusieurs problèmes techniques entravent actuellement leur utilisation clinique. À cet égard, comme dans la génération de cellules iPS, toutes les thérapies d'ingénierie tissulaire doivent produire des cellules libres de transduction de gènes externes afin de maintenir la sécurité des patients. En conséquence, nous avons été le premier groupe à produire avec succès des cellules DFAT humaines ^6. Plusieurs autres groupes de recherche ont depuis adopté notre mét....

Protocole

Des échantillons de graisse sous-cutanée humaine ont été obtenus chez des patients subissant une intervention chirurgicale dans les départements de chirurgie plastique, urologie, chirurgie pédiatrique et chirurgie orthopédique de Nihon University Hospital Itabashi (Tokyo, Japon). Les patients ont donné leur consentement éclairé écrit, et le Comité d'éthique de la Faculté de médecine de l'Université Nihon a approuvé l'étude.

1. Préparation des tissus

1. Amener l'échantillon de tissu à partir de la salle d'opération au laboratoire.
2. Laver 1-2 g de tissu adipeux avec 5 ml de PBS (-) à la température ambia....

Résultats

Dans cette étude, la méthode et d' outils pour DFAT génération de cellules a été améliorée (Figure 1). Notre méthode nous permet de générer des cellules DFAT utilisant à la fois du DCM et du milieu DMEM contenant 20% de FBS (figure 2A). En tant que tel, nous avons comparé l'efficacité de DCM et DMEM dans la génération de cellules DFAT. À cet égard, le DCM amélioré DFAT la prolifération cellulaire par trois fois par rapport au DMEM, quel que.......

Discussion

Adipocytes matures qui subissent en dédifférenciation in vitro, un processus connu sous le nom de la culture de plafond, peuvent revenir à un phénotype plus primitif et d' acquérir des capacités prolifératives. Ces cellules sont appelées graisse comme dédifférenciées (DFAT) cellules. Le potentiel de différenciation multilignée DFAT des cellules a été évaluée. Analyse par cytométrie en flux et l' analyse de l' expression du gène a révélé que les cellules DFAT étaient très homogènes par rappo.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
CSTI303-MSC moyen  ;	CSTI	87-671	Ce milieu est défini comme DCM dans le texte
PBS(-)	Wako	166-23555	Il ne contient pas de Mg2+ et de Ca2+
DMEM milieu	Gibco	11965-092
Sérum fœtal bovin	Sigma	172012
Collagénase de type II	Sigma	C-6885
Ciseaux	Takasago Medical Industry Co., Ltd	TKZ-F2194-1
Shaker	TAITEC	Bioshaker V.BR-36
Falcon Cell Strainer 100 &mu ; m Jaune	CORNING LIFE SCIENCES  ;	DL 352360
Faucon 12,5 cm² ; Fiole de culture cellulaire rectangulaire à col incliné avec bouchon à vis ventilé bleu	CORNING LIFE SCIENCES  ;
Aiguille 18 G	NIPRO	02-002
Seringue de 20 ml  ;	NIPRO	08-753
Compteur de socs série Z	BECKMAN COULTER	383550

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