Isolement et culture de cellules endothéliales primaires de Artères Canine et Veins

Loes A. Oosterhoff; Hedwig S. Kruitwagen; Bart Spee; Frank G. van Steenbeek

doi:10.3791/54786

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Article de méthode

Isolement et culture de cellules endothéliales primaires de Artères Canine et Veins

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DOI :

10.3791/54786

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18 novembre 2016

Loes A. Oosterhoff¹ , Hedwig S. Kruitwagen¹ , Bart Spee¹ , Frank G. van Steenbeek¹

¹Department of Clinical Sciences of Companion Animals, Faculty of Veterinary Medicine, Utrecht University

Dans cet article

Résumé

De nouvelles méthodes d’isolement des cellules endothéliales primaires des vaisseaux sanguins sont nécessaires. Ce protocole décrit une nouvelle technique qui inverse complètement les vaisseaux sanguins d’intérêt, exposant uniquement le côté endothélial à la digestion enzymatique. La culture de cellules endothéliales pures qui en résulte peut être utilisée pour étudier les maladies cardiovasculaires, la modélisation des maladies et l’angiogenèse.

Résumé

Les maladies cardiovasculaires sont étudiées à la fois en médecine humaine et vétérinaire. Les cellules endothéliales ont été largement utilisées comme modèle in vitro pour étudier la vasculogenèse, l’angiogenèse (tumorale) et l’athérosclérose. La norme actuelle pour la recherche in vitro sur les cellules endothéliales humaines (CE) est l’utilisation des cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine (HUVEC) et des cellules endothéliales de l’artère ombilicale humaine (HUAEC). Pour la recherche sur l’endothélium canin, une seule lignée cellulaire (CnAOEC) est disponible, qui est dérivée de l’endothélium aortique canin. Bien qu’elles ne soient pas complètement comprises à l’heure actuelle, il existe une différence entre les CE provenant des artères ou des veines. Pour une approche plus directe des études de fonctionnalité in vitro sur les CE, nous décrivons une nouvelle méthode pour isoler les cellules endothéliales primaires canines (CaPECs) à partir d’une variété de vaisseaux. Cette technique réduit le risque de contamination par des cellules à croissance rapide telles que les fibroblastes et les cellules musculaires lisses, un problème courant dans les méthodes d’isolement standard telles que le rinçage du vaisseau avec des solutions enzymatiques ou le hachage du vaisseau avant la digestion du tissu contenant toutes les cellules. La technique que nous décrivons a été optimisée pour le modèle canin, mais peut facilement être utilisée chez d’autres espèces telles que l’homme.

Introduction

Les chiens sont utilisés comme modèle animal grande pour la recherche sur les maladies cardiovasculaires et peuvent également souffrir de innés (génétiques) anomalies vasculaires ^{1, 2.} Pour étudier ces maladies des lignées de cellules endothéliales commerciales sont souvent utilisés pour évaluer des cellules endothéliales (CE) fonctionnalité. Pour les chiens il y a une ligne de cellules endothéliales commerciale disponible (CnAOEC), dérivé de l'aorte canine. Cette lignée cellulaire est surtout utilisé dans les études comme témoin normal CEs ^3-5. Dans la recherche cardiovasculaire humain lignes de cellules endotheliales les plus couramment ut....