Un protocole automatisé pour l&#39;analyse rapide de la population de fibre musculaire chez le rat Muscle Sections Cross Utilisation myosine chaîne lourde immunohistochimie

Konstantin D. Bergmeister; Marion Gröger; Martin Aman; Anna Willensdorfer; Krisztina Manzano-Szalai; Stefan Salminger; Oskar C. Aszmann

doi:10.3791/55441

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Article de méthode

Un protocole automatisé pour l'analyse rapide de la population de fibre musculaire chez le rat Muscle Sections Cross Utilisation myosine chaîne lourde immunohistochimie

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DOI :

10.3791/55441

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28 mars 2017

Konstantin D. Bergmeister¹^,³ , Marion Gröger² , Martin Aman¹ , Anna Willensdorfer¹ , Krisztina Manzano-Szalai¹ , Stefan Salminger¹ , Oskar C. Aszmann¹

¹CD Laboratory for the Restoration of Extremity Function, Division of Plastic and Reconstructive Surgery, Department of Surgery, Medical University of Vienna, ²Core Facility Imaging, Core Facilities, Medical University Vienna, ³Department of Hand, Plastic and Reconstructive Surgery, Burn Center, BG Trauma Center Ludwigshafen, Plastic and Hand Surgery, University of Heidelberg

Dans cet article

Résumé

Nous présentons ici un protocole d'analyse des fibres musculaires rapides, ce qui permet une meilleure qualité de coloration, et ainsi l'acquisition automatique et la quantification des populations de fibres à l'aide du logiciel ImageJ disponible gratuitement.

Résumé

Quantification des populations de fibres de muscle donne une idée plus précise des effets de la maladie, un traumatisme, et d'autres influences sur la composition du muscle squelettique. Diverses méthodes chronophages ont traditionnellement été utilisées pour étudier les populations de fibres dans de nombreux domaines de recherche. Cependant, récemment mis au point des méthodes immunohistochimiques basées sur l'expression des protéines de chaîne lourde de la myosine fournir une alternative rapide pour identifier les types de fibres multiples dans une seule section. Nous présentons ici un protocole rapide, fiable et reproductible pour une meilleure qualité de coloration, ce qui permet l'acquisition automatique des sections entières et la quantification automatique des populations de fibres avec ImageJ. A cet effet, les muscles squelettiques sont coupés intégrés dans les sections transversales, colorées à l'aide des anticorps chaînes lourdes de myosine avec des anticorps fluorescents secondaires et DAPI pour la coloration des noyaux de cellules. des sections transversales entières sont ensuite balayées automatiquement à l'aide d'un scanner de diapositives pour obtenir composite à haute résolutionimages de l'échantillon entier. Les analyses de la population des fibres sont ensuite effectuées pour quantifier les fibres lentes, intermédiaires et rapides en utilisant une macro automatique pour ImageJ. Nous avons déjà montré que cette méthode permet d'identifier les populations de fibres de manière fiable à un degré de ± 4%. De plus, cette méthode réduit la variabilité inter-utilisateur et le temps par des analyses en utilisant de manière significative la plate-forme open source ImageJ.

Introduction

Composition du muscle squelettique subit de profondes modifications au cours des processus physiologiques tels que le vieillissement ^{^1,} ^2, ³ ^exercice, ^{^4,} ^{^5,} ^{^6,} ⁷ ou processus pathophysiologiques telles que la maladie ^{^8,} ^{^9,} ¹⁰ ou ¹¹ traumatisme. Par conséquent, plusieurs champs de concentré de recherche sur les effets structurels de ....