Un modèle de souris transmissible transitoirement IL-8 pour le<em&gt; In vivo</em&gt; Suivi à long terme des réponses inflammatoires

Résumé

La méthode décrite ici permet la visualisation de l'activation de l'inflammation dépendante du promoteur de l'IL-8 dans les poumons de la souris par une imagerie bioluminescente non invasive (BLI). Le même animal peut être soumis à BLI à plusieurs reprises pendant jusqu'à deux mois à partir du moment de la livraison de la construction de journaliste de luciférase.

Résumé

L'inflammation des voies respiratoires est souvent associée à des infections bactériennes et représente un déterminant majeur de la maladie pulmonaire. La détermination in vivo des capacités pro-inflammatoires de divers facteurs est difficile et nécessite des procédures terminales, telles que le lavage broncho-alvéolaire et l'élimination des poumons pour une analyse in situ , empêchant une visualisation longitudinale dans la même souris. Ici, l'inflammation pulmonaire est induite par l'instillation intratrachéale du surnageant de culture de Pseudomonas aeruginosa (SN) chez des souris transitoires transitoires exprimant le gène rapporteur de la luciférase sous le contrôle d'un promoteur bovin IL-8 hétérologue. L'expression de la luciférase dans le poumon est contrôlée par une analyse de l'image bioluminescente in vivo (BLI) sur un intervalle de temps de 2,5 à 48 heures après l'instillation. La procédure peut être répétée plusieurs fois en 2 à 3 mois, permettant ainsi l'évaluation de la réponse inflammatoire chez les mêmes souris avecLa nécessité de mettre fin aux animaux. Cette approche permet de surveiller les facteurs pro et anti-inflammatoires agissant dans le poumon en temps réel et semble approprié pour les études fonctionnelles et pharmacologiques.

Introduction

Les maladies pulmonaires chroniques, comme l'asthme, la maladie pulmonaire obstructive chronique (MPOC), la fibrose kystique (FC) et la broncheectasie, se caractérisent par une inflammation des voies aériennes. L'inflammation des voies respiratoires se caractérise par un œdème, une infiltration cellulaire, une activation des lymphocytes T et des mastocytes, une augmentation des sécrétions des voies aériennes et un dépôt excessif de collagène. Les FC sont un trouble multisystémique et sa principale cause de mortalité et de morbidité est l'infection bactérienne pulmonaire par une augmentation de l'exacerbation pulmonaire. Le déclin de la fonction pulmon....

Protocole

Toutes les expériences animales décrites ont été approuvées par le comité intramural d'aide animale pour l'expérimentation animale par le Centre interministériel du service de recherche expérimentale à l'Université de Vérone et se conforment à la directive européenne 2010/63 UE, italien D.Lgs 26/2014 et la révision "Guide pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire", Washington, DC: National Academy Press, 1996. Ce protocole et cette expérimentation ont été approuvés par les National Institutes of Health (n 273/15). Les animaux avaient un accès gratuit à l'eau de robinet ramifiée normale et ont été acclimatés pendant au moins 5 jours ....

Résultats

Le modèle de souris transgénique transitoire bIL-8-Luc a été utilisé pour la surveillance in vivo de l'inflammation pulmonaire chez des souris ayant du défi de surnageant bactérien concentré (30x) contenant des facteurs de virulence sécrétés. La réponse inflammatoire induite était détectable par imagerie in vivo comme une augmentation du signal BLI. L'activité pro-inflammatoire était nettement détectable 2,5 h post-instillation, bien que le signal BLI atteigne l.......

Discussion

Dans un travail précédent ¹¹ , un contraste entre les marqueurs BLI et BAL de BIL-8-Luc-dependent a été montré. Il s'est appuyé sur le degré différentiel de sensibilité dans les souches de souris ¹² . Pour cette raison, la première application du modèle bIL-8-Luc à une souche de souris différente nécessite une étude initiale de la réponse inflammatoire, à la fois en termes de BLI et de marqueurs inflammatoires plus standardisés.

La transfec.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
FMT 2500 Système de tomographie par fluorescence	Perkin Elmer Inc.	Constructeur
IVIS Lumina série II Préclinique In Vivo ; Système d’imagerie	Perkin Elmer Inc.	Constructeur
MMPsense 750 FAST	Perkin Elmer Inc.	NEV10001EX	Protéger de la lumière, ranger la sonde à 4 ° ; C
Femelle consanguine BalbC	Harlan Laboratories Italie		Avant l’utilisation, les animaux ont été acclimatés pendant au moins 5 jours aux conditions locales du vivarium
Plasmide bIL-8-Luc	Département des sciences médicales vétérinaires, Université de Parme, Italie		Stocker le plasmide à -20 ° ; C
pGL3vector de base	Promega	E1751	Stocker le vecteur à -20 ° ; C
JetPEI Réactif de transfection d’ADN	Polyplus transfection	201B-001G	Le mélange d’ADN et de JetPEI a été formulé avec un rapport N/P final de 7
D-luciférine sel de potassium 1 g	Perkin Elmer Inc.	122796	Protéger de la lumière, conserver à -20 °C C
Logiciel d’image vivante	Caliper Life Sciences,Experimental	Builder
Isoflurane	ESTEVE spa	571329.8	Ne pas inhaler
le Bio-Plex Cytokine Assay Kit	Bio-Rad Laboratories	M60-009RDPD	Stocker le kit non ouvert à 4 ° ; C
Compteur de cellules automatisé	Dasit XT 1800J	Constructeur
Penn-century modèle DP-4M Insufflateur de puissance sèche	Penn-century	DPM-EXT
Système d’anesthésie gazeuse XGI-8	Perkin Elmer Inc.	Experimental Builder
PE190 micro tube médical	2instruments biologiques snc	BB31695-PE/8
Seringue sans aiguille 5 mL	Terumo	SS*05SE1	Couper les planches du piston à l’aide d’un ciseau
Hamilton 0,10 mL (modèle 1710)	Gastight	81022
Discofix Robinet d’arrêt 3 voies	Braun	4095111
Seringue avec aiguille 1 mL	Pic solution	3,071,260,300,320	Utilisation sans aiguille
Tubes d’alimentation en plastique 18ga x 50 mm	2instruments biologiques snc	FTP-18-50	Couper obliquement la pointe  ;

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