Mesure de la déformabilité et hétérogénéité des globules rouges dans le sang par ektacytomètre

Résumé

Nous présentons ici les techniques pour mesurer la déformabilité des globules rouges et l’hétérogénéité cellulaire par ektacytomètre. Ces techniques sont applicables pour des enquêtes générales de la déformabilité des globules rouges et des enquêtes spécifiques sur les maladies du sang caractérisées par la présence d’hématies rigides et déformables en circulation, telles que l’anémie falciforme.

Résumé

Une diminution des globules rouges déformabilité est caractéristique de plusieurs troubles. Dans certains cas, la mesure de la déformabilité défectueuse peut prédire la gravité de la maladie ou la survenue de complications graves. Ektacytomètre utilisations laser viscosimétrie de diffraction pour mesurer la déformabilité des globules rouges, soumise à la contrainte de cisaillement croissante ou un gradient osmotique à une valeur constante de cisaillement appliquée. Toutefois, les mesures directes de la déformabilité sont difficiles à interpréter lors de la mesure sanguine hétérogène qui se caractérise par la présence d’hématies rigides et déformables. Cela est dû à l’incapacité des cellules rigides pour aligner correctement en réponse à la contrainte de cisaillement et de résultats dans un schéma de diffraction déformée, marquée par une baisse exagérée dans la capacité de déformation apparente. Mesure du degré de distorsion fournit un indicateur de l’hétérogénéité des érythrocytes dans le sang. Dans l’anémie falciforme, c’est en corrélation avec le pourcentage de cellules rigides, qui reflète la concentration d’hémoglobine et de la composition de l’hémoglobine des érythrocytes. En plus de mesurer la capacité de déformation, ektacytomètre gradient osmotique fournit des informations sur la fragilité osmotique et l’état d’hydratation des érythrocytes. Ces paramètres reflètent également la composition de l’hémoglobine des globules rouges de patients drépanocytaires. Ektacytomètre mesure de la déformabilité des populations de globules rouges et donc, logiciel ne fournit pas d’informations sur la déformabilité ou les propriétés mécaniques des érythrocytes individuels. Malgré tout, le but des techniques décrites dans les présentes est de fournir une méthode pratique et fiable pour mesurer la déformation et l’hétérogénéité cellulaire du sang. Ces techniques peuvent être utiles pour le suivi des changements temporels, ainsi que la progression de la maladie et réponse à l’intervention thérapeutique dans plusieurs troubles. L’anémie falciforme est un exemple bien caractérisé. Autres troubles potentiels où les mesures de déformabilité des hématies et/ou d’hétérogénéité sont d’intérêt comprennent la conservation du sang, diabète, infection à Plasmodium , carence en fer et les anémies hémolytiques en raison de défauts de la membrane.

Introduction

Ektacytomètre fournit une mesure pratique de la déformabilité des globules rouges en réponse à des altérations dans la contrainte de cisaillement (mesurée en pascals (Pa)) ou en suspendant l’osmolalité moyenne. Les paramètres pertinents de la déformabilité des globules rouges comprennent l’index de l’élongation maximale (Max AE), une mesure de la capacité de déformation maximale d’un globule rouge à la suite de plus en plus contrainte de cisaillement et contrainte de cisaillement ½ (SS ½), la contrainte de cisaillement nécessaire pour atteindre la moitié maximale déformabilité. ¹ ektacytomètre gradient osmotique possède plusieurs paramètres inf....

Protocole

Tous les sujets de cette étude a donné consentement éclairé conformément à la déclaration d’Helsinki et les protocoles nationaux instituts de santé Institutional Review Board a approuvé.

1. allumer l’ektacytometer

1. Raccordez le tuyau de la solution de nettoyage sur les solutions de polyvinylpyrrolidone (PVP) de haute et basse osmolarité. Veillez à connecter le tube osmolaire 0 à la solution de faible osmolarité et le tube d’osmolaire 500 à la solution osmolaire élevé.
   Remarque : La solution PVP de faible osmolarité devrait avoir une osmolalité entre 35 et 55 milliosmoles par kilogramme (mOsm/kg), un pH de 7,25-7....

Résultats

Les résultats d’ektacytomètre décrits dans ce manuscrit peuvent servir à mesurer la déformabilité des globules rouges dans toutes les conditions. Une représentation schématique de la générale mise en place d’un ektacytometer est illustrée à la Figure 1. Des populations homogènes des érythrocytes vont produire un schéma de diffraction elliptiques en réponse à l’accroissement de la contrainte de cisaillement qui peut être utilisée pour calculer l’indice d’allon.......

Discussion

Les ektacytomètre techniques décrites sont simples et bien automatisé, assurant des résultats valables et reproductibles. Néanmoins, il existe quelques étapes cruciales. Contrôle de la température correcte du sang est important. Stockage à température ambiante pendant plus de huit heures peut affecter SS ½ valeurs. ³⁴ s’assurer que la température de la machine est stable à 37 ° C est également important, comme la viscosité du milieu à suspension est dépendante de la température. Sang doit être com.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
LoRRca MaxSis version standard	Mécatronique	LORC109000
LoRRca MaxSis Osmoscan	Mécatronique	LORC109001
Solution de polyvinylpyrrolidone (PVP) 0mOsm	Mécatronique	QRR030910
Solution de polyvinylpyrrolidone (PVP) 500mOsm	Mécatronique	QRR030930
Solution de polyvinylpyrrolidone (PVP) 5mL flacons	Mécatronique	QRR030901
X propre	Mécatronique	QRR010946
P1000  ;	MilliporeSigma	Z646555
P200	MilliporeSigma	Z646547
P200 Filtres	MidSci	AV200-H
P1250	Filtres MidSci	AV1250-H
Kimwipes	MidSci	8091
1,5 mL Tubes eppendorf	MidSci	AVSS1700
15 mL Flacon conique	MidSci	C15R