Ici, nous présentons un protocole pour la préparation et l’administration stéréotaxique de lymphocytes humains allogéniques dans des souris immunodéficientes transportant des tumeurs primaires du cerveau humain orthotopique. Cette étude fournit une preuve de concept pour la faisabilité et l’efficacité antitumorale des immunothérapies cellulaires intrabrain-livré.
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Article de méthode
Stéréotaxique transfert adoptif de cellules immunitaires cytotoxiques dans des modèles murins de xénogreffes de glioblastome Multiforme Orthotopic homme
* These authors contributed equally
Dans cet article
Résumé
Résumé
Glioblastome multiforme (GBM), le cancers du cerveau primaire plus fréquentes et les plus agressifs chez les adultes, est généralement associé à un mauvais pronostic, et rares thérapies efficaces ont été proposés au cours de la dernière décennie. Parmi les candidats prometteurs pour la conception de nouvelles stratégies thérapeutiques, des immunothérapies cellulaires ont été ciblés pour éliminer très envahissante et chimio-radiorésistant des cellules tumorales, probables impliqué dans une rechute rapide et fatale de ce cancer. Ainsi, administrations de GBM-réactive allogéniques effecteurs de cellule immunitaire, telles que les lymphocytes T Vϒ9Vδ2 humains, dans le voisinage de la tumeur serait représente une occasion unique d’offrir efficace et hautement concentré des agents thérapeutiques directement dans la site des tumeurs malignes de cerveau. Ici, nous présentons un protocole pour la préparation et l’administration stéréotaxique de lymphocytes humains allogéniques dans des souris immunodéficientes transportant des tumeurs primaires du cerveau humain orthotopique. Cette étude fournit une preuve de concept préclinique pour la faisabilité et l’efficacité antitumorale de ces immunothérapies cellulaires qui s’appuient sur des injections stéréotaxiques de lymphocytes humains allogéniques dans lits tumeur intrabrain.
Introduction
GBM (qui grade astrocytome IV), est le cancer de cerveau primitif plus fréquentes et les plus agressifs chez les adultes. En dépit de traitements agressifs qui associent chirurgie et la radio-chimiothérapie, GBM reste associé à un très mauvais pronostic (survie médiane de 14,6 mois et un an-2-mortalité > 73 %)1. Cela prouve que quelques avancées thérapeutiques efficaces ont été validées au cours de la dernière décennie2. Parmi les candidats pour la conception du plus efficace des stratégies thérapeutiques3,4,5, immunothérapies
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Protocole
Les sujets impliquant animaux suivants de procédure s’est déroulée conformément aux directives institutionnelles (accord #00186.02 ; Comité d’éthique régional des Pays de la Loire [France]). PBMC humaines ont été isolées du sang provenant des donneurs sains informés (Etablissement Français du Sang de Nantes, France). Toutes les mesures sont effectuées dans des conditions stériles.
1. Expansion de non spécifique des Lymphocytes effecteurs cytotoxiques T
- Préparer et irradier les cellules nourricières à 35 Gy. Pour la stimulation de 2 x 105 - cellules effectrices de 4 x 10,5 , préparer les PBMC6 10 x ....
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Résultats
Cette étude décrit la stratégie des transferts adoptifs des cellules effectrices immunitaires cellulaires dans le cerveau des souris porteurs de tumeur, basé sur des injections stéréotaxiques réalisées directement dans le lit de la tumeur.
Pour minimiser le risque de lésion cérébrale associée à un volume d’injection grande, la suspension de cellules effectrices doit être concentré (20 x 106 cellules en 15-20 µL de PBS.......
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Discussion
Un transfert adoptif de sélectionné natif ou cellules effectrices immunitaire machiné représente une approche prometteuse pour traiter efficacement les tumeurs, comme les cancers du cerveau infiltrante, en prenant soin de limiter la réactivité contre les cellules non transformées15, 16,17,18. Toutefois, le système nerveux central, qui comprend le cerveau, a un statut particulier de système imm.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Les auteurs remercient le personnel de l’hôpital universitaire animalerie (UTE) de Nantes pour l’élevage et soins, cellulaire et tissulaire d’imagerie de laboratoire central de l’Université de Nantes (MicroPICell) pour l’imagerie et la facilité de la cytométrie en flux (Cytocell) de Nantes pour leur assistance technique d’experts. Ce travail a été financé par l’INSERM, CNRS, Université de Nantes, Institut National du Cancer (INCa #PLBio2014-155), Ligue Nationale contre le Cancer (AO interrégional 2017) et le consortium européen ERA-Net Transcan2 (Immunoglio). L’équipe est financé par la Fondation pour la Recherche Medicale (DEQ20170839118). Ce travail a été réalisé da....
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| PBMC | de 3 donneurs sains différents | ||
| BLCL | de 3 donneurs différents | ||
| Roswell Park Memorial Institute medium (RPMI) | Gibco | 31870-025 | |
| FCS | Dutscher | S1810-500 | |
| L-glutamine | Gibco | 25030-024 | |
| pénicilline/streptomycine | Gibco | 15140-122 | |
| IL-2 | Novartis | proleukin | |
| PHA-L | Sigma | L4144 | |
| Châssis stéréotaxique | Stoelting Co. | 51600 | |
| Adaptateur de souris pour cadre stéréotaxique ; ; | Comté de Stoelting | 51624 | |
| Injecteur-pompe à microseringue ; | WPI | UMP3-4 | |
| Seringue NanoFil | WPI | NF34BV-2 | |
| Souris NSG | Charles River | NSGSSFE07S | |
| Kétamine | Merial | Imalgè ; ne 1000 | |
| Xylazine | Bayer | Rompur 2 % | |
| Ciseaux | WPI | 201758 | |
| Pince | WPI | 501215 | |
| OmniDrill 115/230V | WPI | 503598 | |
| Vicryl 4-0 | Ethicon | VCP397H | |
| Xylocaïne | Astrazeneca | 3634461 |
Références
- Stupp, R., Roila, F. Malignant glioma: ESMO clinical recommendations for diagnosis, treatment and follow-up. Annals of Oncology. 20 Suppl 4, 126-128 (2009).
- Weller, M., Cloughesy, T., Perry, J. R., Wick, W. Standards of care for treatment of....
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Réimpressions et autorisations
