Détection du monoxyde d’azote dans le sang en mesurant Phosphorylation VASP plaquettaire

Sirada Srihirun; Alan N. Schechter; Barbora Piknova

doi:10.3791/58647

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Article de méthode

Détection du monoxyde d’azote dans le sang en mesurant Phosphorylation VASP plaquettaire

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DOI :

10.3791/58647

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7 janvier 2019

Sirada Srihirun¹^,² , Alan N. Schechter² , Barbora Piknova²

¹Department of Pharmacology, Faculty of Dentistry, Mahidol University, ²Molecular Medicine Branch, National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases, National Institutes of Health

Dans cet article

Résumé

Nous présentons ici un protocole pour répondre à l’utilisation potentielle des plaquettes comme un capteur très sensible l’oxyde nitrique dans le sang. Il décrit la préparation de plaquettes initial et l’utilisation des nitrites et de cellules rouges du sang désoxygénés comme générateurs de l’oxyde nitrique.

Résumé

Les plaquettes sont les responsables de la coagulation sanguine correcte des composants sanguins. Leur fonction est fortement réglementée par diverses voies. Un des plus puissants agents vasoactifs, oxyde nitrique (NO), peut aussi agir comme un puissant inhibiteur de l’agrégation plaquettaire. Direct, aucun détection dans le sang n’est très difficile en raison de sa forte réactivité avec hémoglobine acellulaire qui ne limite aucun Half-Life à la gamme de milliseconde. Actuellement, aucun changement après que des interventions sont estimées uniquement ne basée sur les changements mesurés de nitrite et de nitrate (membres de la voie métabolique nitrate-nitrite-pas). Précise toutefois, ces mesures sont assez difficiles à n’interpréter par rapport aux réelles aucune modification, en raison de la nitrite de base élevées naturellement et concentrations qui sont de plusieurs ordres de grandeur plus élevés que des changements attendus pas elle-même de nitrates. Par conséquent, le développement de méthodes simples et directs qui permettraient de détecter directement les N° est depuis longtemps. Ce protocole vise une utilisation potentielle des plaquettes comme une très sensible sans capteur dans le sang. Elle qualifie plasma riche en plaquettes initial (PRP) et préparations des plaquettes lavées et l’utilisation des nitrites et de cellules rouges du sang désoxygénés de pas générateurs. La phosphorylation de la VASP à sérine 239 (P-VASP^Ser239) est utilisée pour détecter la présence de no Le fait que la protéine VASP est fortement exprimée dans les plaquettes et qu’il est phosphorylé rapidement lorsqu’il est présent conduit à une occasion unique d’utiliser cette voie pour ne détecter directement aucune présence dans le sang.

Introduction

Les plaquettes sont des fragments de petites cellules discoïdes dérivés de mégacaryocytes qui sont cruciaux pour la coagulation du sang. La cascade de coagulation est initiée par diverses molécules bioactives (comme le collagène ou ADP), publiés après la blessure de la paroi vasculaire. La processus de coagulation peut être modifiée, parmi divers effecteurs de l’oxyde nitrique (NO). Non, produite naturellement par les cellules de mammifères, est l’un des signaux physiologiques plus polyvalents. Il agit comme un puissant vasodilatateur, le neurotransmetteur et le modulateur immunitaire, pour n’en nommer que quelques-uns de ses nombreuses fonctions. Dans la circulation ....