Les embryons de poissons zèbres sont utilisés pour évaluer la toxicité des composés chimiques. Ils se développent à l'extérieur et sont sensibles aux produits chimiques, permettant la détection de changements phénotypiques subtils. L'expérience ne nécessite qu'une petite quantité de composé, qui est directement ajouté à la plaque contenant des embryons, ce qui rend le système de test efficace et rentable.
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Article de méthode
Évaluation rapide de la toxicité des composés chimiques à l'aide d'embryons de poisson zèbre
Dans cet article
Résumé
Résumé
Le poisson zèbre est un organisme modèle vertébré largement utilisé pour la découverte de médicaments à base de phénotypes. Le poisson zèbre génère de nombreuses descendantes, a des embryons transparents et un développement externe rapide. Les embryons de poissons zèbres peuvent donc également être utilisés pour l'évaluation rapide de la toxicité des médicaments qui sont précieux et disponibles en petites quantités. Dans le présent article, une méthode pour le criblage efficace de la toxicité des composés chimiques utilisant des embryons de 1-5 jours après la fertilisation est décrite. Les embryons sont surveillés par stéréomicroscope pour étudier les défauts phénotypiques causés par l'exposition à différentes concentrations de composés. Des concentrations létales semi-maximales (LC50) des composés sont également déterminées. La présente étude a exigé 3-6 mg d'un composé d'inhibiteur, et l'ensemble de l'expérience prend environ 8-10 h pour être accompli par un individu dans un laboratoire ayant des équipements de base. Le protocole actuel est approprié pour tester n'importe quel composé afin d'identifier les effets toxiques ou hors cible intolérables du composé dans la phase initiale de la découverte de médicaments et de détecter les effets toxiques subtils qui peuvent être manqués dans la culture cellulaire ou d'autres modèles animaux. La méthode réduit les retards procéduraux et les coûts de développement des médicaments.
Introduction
Le développement de médicaments est un processus coûteux. Avant qu'un seul composé chimique ne soit approuvé par la Food and Drug Administration (FDA) et l'Agence européenne des médicaments (EMA), plusieurs milliers de composés sont examinés à un coût de plus d'un milliard de dollars1. Pendant le développement préclinique, la plus grande partie de ce coût est nécessaire pour l'expérimentation animale2. Pour limiter les coûts, les chercheurs dans le domaine du développement de médicaments ont besoin de modèles alternatifs pour le dépistage de l'innocuité des composés chimiques3. Par conséquent, dan....
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Protocole
L'installation centrale de poisson zèbre de l'Université de Tampere dispose d'une autorisation d'établissement accordée par le National Animal Experiment Board (ESAVI/7975/04.05/2016). Toutes les expériences utilisant des embryons de poissons zèbres ont été réalisées selon le gouvernement provincial de finlande orientale, le Département social et de la santé du protocole de l'Unité des services régionaux de Tampere - LSLH-2007-7254/Ym-23.
1. Mise en place de réservoirs d'accouplement de poisson zèbre de nuit
- Placer 2-5 poissons zèbres mâles adultes et 3-5 poissons zèbres femelles adultes dans des réservoirs d'accouplement pendant ....
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Résultats
La partie essentielle de l'évaluation de la toxicité consiste à tester différentes concentrations d'un ou plusieurs composés chimiques dans une seule expérience. Au début, sélectionnez les composés pour l'évaluation de la toxicité, le nombre de concentrations à tester pour chaque composé, et par conséquent, faire un tableau (Figure 3). Nous avons utilisé une couleur unique pour chaque composé pour organiser les échantillons (Figure 3
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Discussion
Le test de toxicité in vitro à l'aide de cellules cultivées peut détecter la survie et les études morphologiques des cellules fournissant des informations limitées sur la toxicité induite par le composé d'essai. L'avantage du criblage de toxicité des composés chimiques utilisant des embryons de poisson zèbre est la détection rapide des changements phénotypiques induits chimiquement dans un animal entier pendant le développement embryonnaire dans un organisme modèle pertinent. Environ 70 % des gènes humains codan.......
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Déclarations de divulgation
Aucun conflit d'intérêts potentiel n'a été signalé par les auteurs.
Remerciements
Le travail a été soutenu par des subventions de la Fondation Sigrid Juselius (SP, MP), de la Fondation culturelle finlandaise (AA, MH), de l'Académie de Finlande (SP, MP), de la Fondation Orion Farmos (MH), de la Tampere Tuberculosis Foundation (SP, MH et MP) et de la Fondation Jane et Aatos Erkko (SP et MP). ). Nous remercions nos collaborateurs italiens et Français, le professeur Supuran et le professeur Winum, d'avoir fourni des inhibiteurs de l'anhydrase carbonique pour l'évaluation de l'innocuité et de la toxicité à des fins de développement de médicaments antituberculeux et anticancéreux. Nous remercions Aulikki Lehmus et Marianne Kuuslahti pour l'assistance tec....
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Plaques à 24 puits | Nunc | Thermo Scientific | |
| Balance (balance) | Balance KERN | PLJ3000-2CM | |
| (balance) | Mettler Toledo | AB104-S/PH | |
| CaCl2 | JT. Baker | RS421910024 | |
| Sonde de Dsection | Thermo Scientific | 17-467-604 ; | |
| DMSO | Sigma Aldrich, Allemagne | D4540 | |
| Falcon tubes 15 mL | Greiner bio-one | 188271 | |
| Méthylcellulose de haut poids moléculaire | Sigma Aldrich, Allemagne | M0262 ; | |
| Incubateur pour larves de poisson-zèbre | Termaks | B8000 | |
| KCL | Merck | 1.04936.0500 | |
| Methyl Blue | Sigma Aldrich, Allemagne | 28983-56-4 | |
| MgSO4 | Sigma Aldrich, Allemagne | M7506 | |
| Microcentrifugeuses | tubes Starlab | S1615-5500 | |
| NaCl | VWR Chemicals | 27810.295 | |
| Paraffine Histoplast IM | Thermo Scientific | 8331 | |
| Pipette Pasteur ; | Sarstedt | 86.1171 | |
| Boîte de Pétri | Thermo Scientific | 101R20 ; | |
| Plaques de Pétri | Sarstedt | 82.1473 | |
| Pipette (1 mL et 200 &mu ; L) | Thermo Scientific | 4641230N, 4641210N ; ; | |
| Plaques 24 puits | Thermo Scientific | 142485 | |
| Steriomicroscope/Caméra | Zeiss | Stemi 2000-C/Axiocam 105 | |
| (1,5 mL) | Fisherbrand | 11569914 | |
| Zebrafish AB souches | ZIRC ; | ; ZL1 ; |
Références
- Amaouche, N., Casaert Salome, H., Collignon, O., Santos, M. R., Ziogas, C. Marketing authorization applications submitted to the European Medicines Agency by small and medium-sized enterprises: an analysis of major objections and their impact on outcomes. Drug Discovery Today. 23 (10), 1801-1805 (2018).
- Garg, R. C., Bracken, W. M., Hoberman, A.....
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Réimpressions et autorisations
