Modèle de xénogreffe hétérogène dérivé par le patient du cancer du pancréas à l'aide de larves de poisson zèbre comme hôtes pour l'évaluation comparative des médicaments

Lei Wang; Huan Chen; Fei Fei; Xianfeng He; Shaoyang Sun; Kunpeng Lv; Bo Yu; Jiang Long; Xu Wang

doi:10.3791/59507

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Article de méthode

Modèle de xénogreffe hétérogène dérivé par le patient du cancer du pancréas à l'aide de larves de poisson zèbre comme hôtes pour l'évaluation comparative des médicaments

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DOI :

10.3791/59507

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30 avril 2019

Lei Wang^*¹ , Huan Chen^*²^,³ , Fei Fei^*¹ , Xianfeng He²^,³ , Shaoyang Sun¹ , Kunpeng Lv¹ , Bo Yu²^,³ , Jiang Long²^,⁴^,⁵^,⁶ , Xu Wang¹

¹Department of Biochemistry and Molecular Biology, Key Laboratory of Metabolism and Molecular Medicine, Ministry of Education, School of Basic Medical Sciences, Fudan University, ²National Human Genetic Resources Sharing Service Platform (2005DKA21300), ³Fudan University Shanghai Cancer Center, ⁴Department of Pancreatic Surgery, Fudan University Shanghai Cancer Center, ⁵Department of Oncology, Shanghai Medical College, Fudan University, ⁶Pancreatic Cancer Institute, Fudan University

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit des procédures d'optimisation dans un modèle de xénogreffe de tumeur à base de virus à double fluorescence utilisant le poisson zèbre larvaire comme hôtes. Ce modèle hétérogène de xénogreffe imite la composition tissulaire du microenvironnement pancréatique de cancer in vivo et sert d'outil plus précis pour évaluer des réponses de drogue dans les modèles personnalisés de zPDX (xénogreffe patient-dérivé de zèbre).

Résumé

Le xénogreffe de tumeur patient-dérivé (PDX) et le xénogreffe de tumeur cell-dérivé (CDX) sont des techniques importantes pour l'évaluation préclinique, le guidage de médicament et les recherches fondamentales de cancer. Des générations de modèles PDX chez les souris hôtes traditionnelles prennent beaucoup de temps et ne fonctionnent que pour une petite proportion d'échantillons. Récemment, le poisson zèbre PDX (zPDX) est apparu comme un système d'accueil unique, avec les caractéristiques de petite échelle et de haute efficacité. Ici, nous décrivons une méthodologie optimisée pour produire un modèle de xénogreffe de tumeur à double fluorescence-étiqueté pour l'évaluation comparative de chimiothérapie dans les modèles de zPDX. Les cellules tumorales et les fibroblastes ont été enrichis à partir de tissus du cancer du pancréas fraîchement récoltés ou congelés à différentes conditions de culture. Les deux groupes cellulaires ont été étiquetés par lentivirus exprimant des protéines fluorescentes vertes ou rouges, ainsi qu'un gène anti-apoptose BCL2L1. Les cellules transfectées ont été prémélangées et co-injectées dans le poisson zèbre larvaire à 2 dpfs qui a ensuite été élevé dans un milieu E3 modifié à 32 oC. Les modèles de xénogreffe ont été traités par des drogues de chimiothérapie et/ou l'inhibiteur de BCL2L1, et les viabilities des cellules de tumeur et des fibroblastes ont été étudiées simultanément. En résumé, ce protocole permet aux chercheurs de générer rapidement une grande quantité de modèles zPDX avec un microenvironnement hétérogène de tumeur et fournit une fenêtre d'observation plus longue et une quantitation plus précise dans l'évaluation de l'efficacité des candidats-médicaments.

Introduction

L'oncologie de précision vise à trouver les stratégies thérapeutiques les plus bénéfiques pour chaque patient¹. Actuellement, de nombreux modèles précliniques tels que la culture primaire in vitro, la culture organoïde in vitro², et les xénogreffes dérivées du patient (PDX) chez la souris avant ou après la culture organoïde sont proposés pour le diagnostic et pour dépister/évaluer le potentiel choix thérapeutiques³. Le modèle PDX généré par l'injection de cellules cancéreuses primaires humaines chez des souris immunodéprimées est l'un des outils les plus prometteurs pour le dépistage personnalisé ....