Une méthode pour fournir des cellules souches neurales, adaptable pour injecter des solutions ou des suspensions, par l’artère carotide commune (souris) ou l’artère carotide externe (rat) après un AVC ischémique est rapporté. Les cellules injectées sont réparties largement dans tout le parenchyme cérébral et peuvent être détectées jusqu’à 30 d après l’accouchement.
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Article de méthode
Livraison intra-artérielle de cellules souches neuronales au cerveau du rat et de la souris : application à l’ischémie cérébrale
Dans cet article
Résumé
Résumé
La thérapie à base de cellules souches neuronales est un nouveau traitement novateur pour les accidents vasculaires cérébraux, les lésions cérébrales traumatiques et les troubles neurodégénératifs. Par rapport à la livraison intracrânienne, l’administration intra-artérielle des NSC est moins invasive et produit une distribution plus diffuse des NSC dans le parenchyme cérébral. En outre, la livraison intra-artérielle permet l’effet de première passe dans la circulation du cerveau, réduisant le potentiel de piégeage des cellules dans les organes périphériques, tels que le foie et la rate, une complication associée aux injections périphériques. Ici, nous détaillons la méthodologie, chez les souris et les rats, pour la livraison des NSC par l’artère carotide commune (souris) ou l’artère carotide externe (rat) à l’hémisphère ipsilateral après un accident vasculaire cérébral ischémique. À l’aide de NSC étiquetés GFP, nous illustrons la distribution généralisée réalisée dans tout l’hémisphère ipsilateral des rongeurs à 1 d, 1 semaine et 4 semaines après l’accouchement postischemique, avec une densité plus élevée dans ou près du site de blessures ischémiques. En plus de la survie à long terme, nous montrons des preuves de différenciation des cellules étiquetées GFP à 4 semaines. L’approche de livraison intra-artérielle décrite ici pour les NSC peut également être utilisée pour l’administration de composés thérapeutiques, et a donc une large applicabilité aux diverses lésions du SNC et les modèles de maladies chez plusieurs espèces.
Introduction
La thérapie à base de cellules souches (SC) offre un potentiel énorme en tant que traitement des maladies neurologiques, y compris les accidents vasculaires cérébraux, les traumatismes crâniens et la démence1,2,3,4,5,6. Cependant, une méthode efficace pour fournir des SC exogènes au cerveau malade reste problématique2,6,7,8,
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Protocole
Toutes les procédures sur les sujets animaux ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux (IACUC) de l’Université du Kentucky, et des précautions appropriées ont été prises pour minimiser le stress ou la douleur associés à la chirurgie.
1. Préparation de cathéters d’injection et de crochets chirurgicaux
- Construire le cathéter d’injection (figure 1). Recueillir les matériaux nécessaires, y compris: MRE010, MRE025, et MRE050 tubes, 20 G, 26 G et 27 G aiguilles d’injection (Figure 2A), 600 papier de verre de gravier, superglue et deux....
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Résultats
Les NSC étiquetés GFP ont été facilement détectés dans le cerveau ischémique, principalement dans l’hémisphère ipsilateral, en particulier dans la pénombre et le long de la jante de blessure (Figure 6). L’examinateur a été aveugle pendant l’imagerie et l’analyse.
Par exemple, à 1 d après l’injection, des NSC ont été détectés dans l’hippocampe de souris. Un sous-ensemble de NSCs a montré la co-expression du marqueur de neurone immature DCX dans le gyrus denté même .......
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Discussion
La thérapie de cellules souches pour les maladies neurologiques est encore à un stade exploratoire précoce. Un problème majeur est qu’il n’existe pas de méthode établie pour une livraison suffisante de SC ou de NSC dans le cerveau.
Bien que des CSC/NSC exogènes puissent être détectés dans le cerveau après l’injection intraveineuse (IV), intrapéritoneal (IP) ou intraparenchymal/intracérébrale, chaque approche d’accouchement présente des inconvénients. On estime que la population détectable dans.......
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Remerciements
Cette recherche a été soutenue par ce qui suit : Prix AHA 14SDG20480186 pour LC, équipe d’innovation sujet de l’Université Shanxi de médecine chinoise 2019-QN07 pour BZ, et Kentucky Spinal Cord and Head Injury Research Trust subvention 14-12A pour KES et LC.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Aiguille 20 g | Becton & Dickinson | BD PrecisionGlide 305175 | préparation du cathéter d’injection |
| 26 G aiguille | Becton & Dickinson | BD PrecisionGlide 305111 | préparation du cathéter d’injection |
| 27 G aiguille | Becton & Dickinson | BD PrecisionGlide 305136 | préparation du cathéter d’injection |
| 4-0 NFS-2 suture avec aiguille | Henry Schein Santé animale | 56905 | |
| chirurgie 6-0 suture en nylon | Teleflex/Braintree Scientific | 104-s | chirurgie |
| Accutase | STEMCELL Technologies | 7922 | solution de détachement de cellules |
| Bard-Parker | 10 | chirurgie | |
| Buprénorphine-SR Lab | ZooPharm | Buprénorphine-SR Lab® ; | analgésie (0,6-1 mg/kg sur 3 jours) |
| Calcium/magnisum sans PBS | VWR | 02-0119-0500 | Dissociation NSC |
| Anticorps DCX | Millipore | AB2253 | immunomarquage |
| Anticorps GFAP | Invitrogen | 180063 | immunomarquage |
| Isoflurane | Henry Schein Santé animale | 50562-1 | chirurgie |
| MCAO filament pour souris | Doccol | 702223PK5Re | chirurgie |
| Filament MCAO pour rat | Doccol | 503334PK5Re | chirurgie |
| MRE010 cathéter | Braintree Scientific | MRE010 | préparation du cathéter d’injection |
| MRE025 cathéter | Braintree Scientific | MRE025 | préparation du cathéter d’injection |
| MRE050 Cathéter | Braintree Scientific | MRE050 | préparation du cathéter d’injection |
| Nu-Tears Pommade | NuLife Pharmaceuticals | Nu-Tears Pommade pour les | yeux pendant la chirurgie |
| S& Pince en T - SuperGrip Tips JF-5TC Angled | Fine Science Tools | 00649-11 | chirurgie |
| S& Pince en T - SuperGrip Tips JF-5TC Straight | Fine Science Tools | 00632-11 | chirurgie |
| Superglue | Pacer Technology | 15187 | préparation du cathéter d’injection |
| pompe à seringue | Kent Scientific | GenieTouch | chirurgie |
| Tuj1 anticorps | Millipore | MAb1637 | immunocoloration |
| bi-composant 5 minute époxy | Devcon | 20445 | préparation du cathéter d’injection |
| Ciseaux à ressort Vannas | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| chirurgie pinces vasculaires | Fine Science Tools | 00400-03 | chirurgie |
| microscope Zeiss | Axio Imager 2 | microscopie |
Références
- Wang, Y. Stroke research in 2017: surgical progress and stem-cell advances. The Lancet. Neurology. 17, 2-3 (2018).
- Bliss, T., Guzman, R., Daadi, M., Steinberg, G. K. Cell transplantation therapy for stroke. Stroke. 38, 817-826 (2007).
- Boese, A. C., Le, Q. E., Pham, D.,....
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Réimpressions et autorisations
