Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.

Article de méthode

Approche systématique pour identifier les nouvelles molécules antimicrobiennes et antibiofilms à partir d’extraits et de fractions de plantes pour prévenir les caries dentaires

6K vues

⸱

DOI :

10.3791/61773

⸱

31 mars 2021

 ,  ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Les produits naturels représentent des points de départ prometteurs pour le développement de nouveaux médicaments et agents thérapeutiques. Cependant, en raison de la grande diversité chimique, trouver de nouveaux composés thérapeutiques à partir des plantes est une tâche difficile et longue. Nous décrivons une approche simplifiée pour identifier les molécules antimicrobiennes et antibiofilms à partir d’extraits de plantes et de fractions.

Résumé

Les produits naturels fournissent des substances structurellement différentes, avec une myriade d’activités biologiques. Toutefois, l’identification et l’isolement des composés actifs par rapport aux plantes sont difficiles en raison de la matrice complexe des plantes et des procédures d’isolement et d’identification qui prennent beaucoup de temps. Par conséquent, une approche stepwise pour le criblage des composés naturels des usines, y compris l’isolement et l’identification des molécules potentiellement actives, est présentée. Il comprend la collecte du matériel végétal; préparation et fractionnement d’extraits bruts; les approches de chromatographie et de spectrométrie (UHPLC-DAD-HRMS et NMR) pour l’analyse et l’identification des composés; bioassays (activités antimicrobiennes et antibiofilms; « force d’adhérence » bactérienne à la pellicle salivaire et matrice de glucane initiale traitée avec des traitements sélectionnés); et l’analyse des données. Le modèle est simple, reproductible, et permet un criblage à haut débit de plusieurs composés, concentrations et étapes de traitement peuvent être constamment contrôlés. Les données obtenues fournissent les bases d’études futures, y compris des formulations avec les extraits et/ou fractions les plus actifs, l’isolement des molécules, la modélisation des molécules à des cibles spécifiques dans les cellules microbiennes et les biofilms. Par exemple, une cible pour contrôler le biofilm cariogenic est d’inhiber l’activité des glucosyltransferases de Streptococcus mutans qui synthétisent les glucanes de la matrice extracellulaire. L’inhibition de ces enzymes empêche l’accumulation de biofilm, diminuant sa virulence.

Introduction

Les premiers modèles de médecine utilisés dans les sociétés étaient basés sur des produits naturels (PN). Depuis lors, les humains ont été à la recherche de nouveaux produits chimiques dans la nature qui peuvent être transformés enmédicaments 1. Cette recherche a entraîné une amélioration continue des technologies et des méthodes de dépistage ethnobotanique1,2,3. Les PN offrent une riche source de substances structurellement diversifiées, avec un large éventail d’activités biologiques utiles pour développer des thérapies alternatives ou adjuvantes. Tou....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Protocole

1. Collection de matériel végétal

  1. Matériel végétal
    1. Enregistrez l’accès au matériel végétal sur des plateformes électroniques qui régulent l’accès au patrimoine génétique dans le pays où la collecte aura lieu. Par exemple, au Brésil, inscrivez-vous auprès du Système national pour la gestion du patrimoine génétique et des savoirs traditionnels associés – SisGen (site Web https://sisgen.gov.br/paginas/login.aspx).
    2. Recueillir des échantillons du matériel végétal d’intérêt (p. ex., feuilles, tiges, racines, fleurs, fruits). Inscrivez-vous si le matériel a été recueilli pendant la reproduction ou la phase végétative.
    3. Enregistrez les p....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Résultats

Nous fournissons un exemple d’utilisation d’une approche systématique pour examiner l’activité biologique des extraits et des fractions de plantes afin d’identifier des molécules potentiellement actives pour de nouvelles thérapies anti-caries possibles : activités antimicrobiennes et antibiofilms de Casearia sylvestris extraits de biomes brésiliens distincts contre streptocoques mutans et candida albicans13.

Fond
Les intera.......

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Discussion

Les principaux défis liés au travail avec des extraits bruts naturels comprennent leur composition complexe et les insuffisances des études classiques d’isolement bioguidé. Bien que ce processus soit lent, il est efficace et a mené à des résultats majeurs dans la recherche sur les PN. Pour rationaliser, des études axées sur la hiérarchisation sont nécessaires pour rationaliser. Ainsi, l’utilisation d’approches modernes de profilage chimique pour l’analyse de l’EC et la redondant avant l’isolement sont importantes pour ca.......

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Déclarations de divulgation

Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Remerciements

Nous exprimons notre gratitude à Núcleo de Bioensaios, Biossíntese e Ecofisiologia de Produtos Naturais (NuBBE) de l’Institut de chimie de l’UNESP, Araraquara/SP pour avoir fourni les laboratoires pour la préparation du matériel végétal. Nous remercions également le Laboratoire de microbiologie appliquée du Département des matériaux dentaires et de la prosthodontie, l’UNESP, Araraquara/SP. Cette recherche a été appuyée par une subvention de recherche de la São Paulo Research Foundation (FAPESP #2013/07600-3 à l’AJC) et des bourses d’études ainsi que des fonds généraux (FAPESP #2017/07408-6 et FAPESP #2019/23175-7 au SMR; #2011/21440-3 et #2012/21921-4 au PCPB). Le Con....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Microplaques à 96 puits  ;KasviFond
Charbon actifLABSYNTHÉtape de nettoyage et/ou de fractionnement
m, 100 ;
DiméthylsulfoxydeSigma-AldrichSolution pour véhicule
Lecteur de plaques ELISABiochrom Ez
EthanolJ. T. BakerPour les étapes d’extraction et de fractionnement, et la composition
ÉthanolSigma-AldrichSolution pour véhicule
Acétate d’éthyleJ. T. BakerÉtape de fractionnement
LogicielGraphPad La JollaGraphPad Prism7
HexaneJ. T. BakerÉtape de fractionnement
IncubateurThermo Scientific
IsopropanolJ. T. BakerPour l’étape
Lyophiliseur (un lyophilisateur)SavantModulyo
Nylon MilliporeLAC0.22 µ ; Agitateur orbital m x 13 mm
QuimisModèle G816&thinsp ; M20
Cartouche d’extraction en phase solidepolyamide Macherey-NagelÉtape de nettoyage et/ou de fractionnement
63&thinsp ; &mu ; m, 60&thinsp ;  ;
Chlorure de sodium (NaCl)Synth0,89 % dans l’eau Cartouches d’extraction
phase solide (SPE)Macherey-NagelÉtape de nettoyage et/ou de fractionnement
Difco
plat Broyeur analytique Ika LabortechniK Modèle A11 Basic Plaques de gélose au sang Laborclin Colonne chromatographique C18 Phenomenex Kinetex 150 × ; 2,1 mm, 2,6 & micro ;de la phase mobiled’extraction Gel de silice Merck 40&ndash ; en Tryptone Difco UHPLC-DAD Dionex Ultimate 3000 RS Bain à ultrasons UNIQUE Modèle USC 2800 Extrait de levure

Références

  1. Newman, D. J., Cragg, G. M. Natural Products as Sources of New Drugs over the Nearly Four Decades from 01/1981 to 09/2019. Journal of Natural Products. 83 (3), 770-803 (2020).
  2. Wolfender, J. L., Litaudon, M., Touboul, D., Queiroz, E. F.

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Réimpressions et autorisations

Explorer plus d’articles

Activité antimicrobienneactivité antibiofilmextraits de plantesextraction sur phase solideUHPLC-DAD-HRMSanalyse RMNStreptococcus mutanspellicle salivairematrice de glucaneinhibition du biofilm