Ce rapport décrit les méthodes permettant de générer un modèle d’épilepsie du lobe temporal basé sur l’allumage électrique de souris transgéniques VGAT-Cre. Les souris VGAT-Cre allumées peuvent être utiles pour déterminer les causes de l’épilepsie et pour dépister de nouvelles thérapies.
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Article de méthode
Préparation et implantation d’électrodes pour allumer électriquement des souris VGAT-Cre afin de générer un modèle pour l’épilepsie du lobe temporal
Dans cet article
Résumé
Résumé
Il a été découvert que l’allumage électrique des souris VGAT-Cre a conduit aux crises spontanées motrices et électrographiques. Un article récent s’est concentré sur la façon dont les souris VGAT-Cre uniques ont été utilisées dans le développement de crises spontanées récurrentes (SRS) après l’allumage et un mécanisme probable - l’insertion de Cre dans le gène VGAT - a perturbé son expression et réduit le tonus GABAergique. La présente étude étend ces observations à une plus grande cohorte de souris, en se concentrant sur des questions clés telles que la durée du SRS après l’allumage et l’effet du sexe et de l’âge de l’animal. Ce rapport décrit les protocoles pour les étapes clés suivantes : fabrication de casques avec des électrodes de profondeur hippocampiques pour la stimulation électrique et pour la lecture de l’électroencéphalogramme; chirurgie pour fixer solidement le casque sur le crâne de la souris afin qu’il ne tombe pas; et les détails clés du protocole d’allumage électrique tels que la durée de l’impulsion, la fréquence du train, la durée du train et la quantité de courant injecté. Le protocole d’allumage est robuste en ce sens qu’il conduit de manière fiable à l’épilepsie chez la plupart des souris VGAT-Cre, fournissant un nouveau modèle pour tester de nouveaux médicaments antiépileptogènes.
Introduction
L’épilepsie est un trouble neurologique majeur qui entraîne des charges économiques et humaines importantes. NINDS estime qu’il y a 3 millions d’Américains atteints d’épilepsie. Environ 0,6 million de ces patients souffrent d’épilepsie du lobe temporal (EAL)1. Malheureusement, le traitement médical du TLE échoue chez un tiers des patients en raison de l’inefficacité, du développement d’une résistance aux médicaments ou d’une intolérance aux effets secondaires2. De toute évidence, il existe un besoin important de développer de nouvelles thérapies pour le TLE, une conclusion partagée par le comité scientifique fondamental ....
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Protocole
L’utilisation des animaux a suivi les directives ARRIVE12 et a été approuvée par le Comité de soin et d’utilisation des animaux de l’Université de Virginie.
1. Fabrication de casques avec deux électrodes bipolaires (Figure 1)
Figure 1 : Étapes clés de la fabrication d’un casque EEG. (A) Apparition des électrodes aux différentes étapes du protocole ....
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Résultats
Animaux
Le modèle a été développé à l’origine en utilisant des souris VGAT-Cre (Slc32a1tm2(cre)Lowl/J)13 sur fond mixte. Cependant, il a également été appliqué à la souche VGAT-Cre qui est congénique avec C57BL/6J. Aucune différence n’a été observée dans l’épilepsie qui se développe entre les souches. Les deux souches expriment la Cre recombinase sous le contrôle du promoteur transporteur vésiculaire GABA. Ces souris ont été générées en frappant dans une cassette IRE.......
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Discussion
Ce rapport décrit un protocole où l’allumage électrique de souris conduit à l’épilepsie. Puisque l’électrode stimulante est placée dans l’hippocampe, il s’agit d’une épilepsie limbique focale qui modélise l’épilepsie du lobe temporal (TLE) chez les patients. Une étape critique de ce protocole consiste à utiliser des souris VGAT-Cre qui, en raison de l’insertion d’une cassette de recombinase IRES-Cre dans le gène Vgat , présentent des courants GABA inhibiteurs altérés11. C57BL/6 ne dévelop.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont aucun conflit à révéler.
Remerciements
Les auteurs remercient John Williamson pour ses discussions utiles sur ce protocole. Ce travail a été soutenu par la subvention NS112549 des NIH/NINDS.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Amplificateur AC différentiel extracellulaire 16 canaux (115V/60Hz) | AD Instruments | AM3500-115-60 | Amplificateur EEG alternatif |
| 363/CP PLUG COLLAR, PINS SLEEVE | P1 Technologies | 363SLEEVPIN0NL | Pour porte-électrode |
| Câble, 363-363 5CM - 100CM W/MESH 6TCM | P1 Technologies | 363363XXXXCM004 | souris-commutateur |
| Caméras CCTV Qcwox HD Sony IR LED | Sony | QC-SP316 | |
| Commutateur SL6C/SB (simple brosse) | P1 Technologies | 8BSL6CSBC0MT | anciennement Plastics One, Inc. |
| Amplificateur de courant | A-M Systems | Modèle 2100 | |
| Ciment dentaire | Stoelting | 51459 | |
| Forets, #75, OD ; 0.310" LOC 130 PT | Kyocera | 105-0210.310 | |
| E363/0 SOCKET CONTACT SKEWED | P1 Technologies | 8IE3630XXXXE | broches pour connecteur |
| iBond Self Etch glue | Kulzer | CE0197 | |
| MS363 PEDESTAL 2298 6 PIN WHITE | P1 Technologies | 8K000229801F | Connecteur de casque EEG |
| Ohmeter | Simpson | 260 | Haute sensibilité |
| PowerLab 16/35 et LabChart Pro | AD Instruments | PL3516/P | Logiciel EEG alternatif |
| SomnoSuite | Kent Scientific Corp. | SS-01 | unité d’anesthésie & RightTemp monitoring |
| Kit de perceuse stéréotaxique et de micromoteur | Foredom Electric Co. | K.1070 | |
| Cadre stéréotaxique | David Kopf Instruments | Modèle 940 | |
| Fil revêtu de téflon pour électrode de profondeur, OD 0.008'A-M | Systems | 791400 | |
| Souris VGAT-Cre sur fond congénique C57BL/6J | The Jackson Laboratory | 000664 |
Références
- Lekoubou, A., Bishu, K. G., Ovbiagele, B. Nationwide trends in medical expenditures among adults with epilepsy: 2003-2014. Journal of the Neurological Sciences. 384, 113-120 (2018).
- Hauser, W. A., Hesdorffer, D. C. Epilepsy: Frequency, Causes,....
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Réimpressions et autorisations
