Ce protocole décrit une nouvelle méthode pour administrer des médicaments antirétroviraux combinés oraux qui suppriment avec succès la réplication de l’ARN du VIH-1 chez des souris humanisées.
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Article de méthode
Traitement antirétroviral combiné oral chez des souris humanisées infectées par le VIH-1
Dans cet article
Résumé
Résumé
La pandémie du virus de l’immunodéficience humaine (VIH-1) continue de se propager sans relâche dans le monde entier et, à l’heure actuelle, il n’existe aucun vaccin contre le VIH. Bien que la thérapie antirétrovirale combinée (cART) ait réussi à supprimer la réplication virale, elle ne peut pas éradiquer complètement le réservoir des personnes infectées par le VIH. Une stratégie de guérison sûre et efficace de l’infection par le VIH nécessitera des méthodes à plusieurs volets et, par conséquent, les progrès des modèles animaux pour l’infection par le VIH-1 sont essentiels au développement de la recherche sur la guérison du VIH. Les souris humanisées récapitulent les principales caractéristiques de l’infection par le VIH-1. Le modèle murin humanisé peut être infecté par le VIH-1 et la réplication virale peut être contrôlée par des schémas thérapeutiques cART. De plus, l’interruption de la cART entraîne un rebond viral rapide chez les souris humanisées. Cependant, l’administration de cART à l’animal peut être inefficace, difficile ou toxique, et de nombreux schémas thérapeutiques de TAR cliniquement pertinents ne peuvent pas être utilisés de manière optimale. En plus d’être potentiellement dangereuse pour les chercheurs, l’administration de cART par une procédure d’injection quotidienne intensive couramment utilisée induit un stress par contention physique de l’animal. La nouvelle méthode orale cART pour traiter les souris humanisées infectées par le VIH-1 décrite dans cet article a entraîné une suppression de la virémie inférieure au seuil de détection, une augmentation du taux de restauration du CD4+ et une amélioration de la santé globale chez les souris humanisées infectées par le VIH-1.
Introduction
L’espérance de vie des personnes infectées par le virus de l’immunodéficience humaine chronique (VIH) s’est considérablement améliorée grâce au traitement antirétroviral combiné (TARc)1,2. cART réduit avec succès la réplication du VIH-1 et augmente le nombre de lymphocytes T CD4+ jusqu’à la normale chez la majorité des participants infectés de façon chronique par le VIH-13, ce qui entraîne une amélioration de la santé globale et une réduction spectaculaire de la progression de la maladie4. Cependant, le réservoir latent du VIH-1 est établi même lorsque le TAR est....
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Protocole
Des tissus fœtaux humains anonymisés ont été acquis commercialement. La recherche sur les animaux a été menée conformément aux protocoles approuvés par l’Université de Californie à Los Angeles et le Comité de recherche animale (ARC) de l’UCLA, conformément à toutes les directives fédérales, étatiques et locales. Plus précisément, toutes les expériences ont été menées conformément aux recommandations et aux lignes directrices pour l’hébergement et les soins des animaux de laboratoire des National Institutes of Health (NIH) et de l’Association for the Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AALAC) International en vertu du protocole UCLA ARC numéro 2010-....
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Résultats
En supposant qu’une souris pesant moyenne 25 g consomme 4 g de nourriture par jour, la dose quotidienne de médicament par voie orale correspond à 2,88 mg / kg de TFV, 83 mg / kg FTC et 768 mg / kg RAL. Pour vérifier si le régime alimentaire optimisé est toxique et influence la santé globale par rapport à l’injection quotidienne de cART, le poids des souris a été surveillé chaque semaine avant et pendant le TAR par injection orale ou sous-cutanée. Il n’y avait pas de différence de poids significative avant l’administratio.......
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Discussion
Une méthode d’administration orale de cART est développée ici pour les souris humanisées infectées par le VIH-1 en combinant trois médicaments antirétroviraux dans des aliments riches en nutriments. Par rapport à l’administration par injections quotidiennes, l’administration orale est plus facile à utiliser, limite la fréquence d’administration, réduit la manipulation des animaux, minimise le stress et améliore la sécurité55. Jusqu’à présent, seules quelques études sur des souris humanisées 24,37,.......
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Déclarations de divulgation
SK est l’un des fondateurs de CDR3 Inc. Les autres auteurs déclarent que la recherche a été menée en l’absence de toute relation commerciale ou financière qui pourrait être interprétée comme un conflit d’intérêts potentiel.
Remerciements
Nous tenons à remercier les Drs Romas Geleziunas et Jeff Murry ainsi que les employés de Gilead pour avoir fourni les médicaments antirétroviraux utilisés dans cette étude. Ce travail a été financé par NCI 1R01CA239261-01 (à Kitchen), NIH Grants P30AI28697 (UCLA CFAR Virology Core, Gene and Cell Therapy Core et Humanized Mouse Core), U19AI149504 (PIs: Kitchen & Chen), CIRM DISC2-10748, NIDA R01DA-52841 (à Zhen), NIAID R2120200174 (PIs: Xie & Zhen), IRACDA K12 GM106996 (Carrillo). Ce travail a également été soutenu par le UCLA AIDS Institute, le James B. Pendleton Charitable Trust et la McCarthy Family Foundation.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Boîte de Pétri de 60 mm | Thermo Scientific Nunc | 150288 | Pour l’aliquotage de l’ART alimentaire |
| APC Anticorps CD8 anti-humain | Biolegend | 344722 | Pour la cytométrie en flux |
| BD LSRFortessa | BD biosciences | Pour la collecte de données en flux | |
| Microbilles CD34 | Miltenyi Biotec | 130-046-702 | Pour la génération de souris NSG-BLT |
| Tubes | à centrifugerFalcon | 14-432-22 | Pour dissoudre le TAR |
| DietGel Boost | ClearH2O | 72-04-5022 | Pour la fabrication d’aliments pour TAR, |
| Elvitégravir | Gilead | Offert par Gilead | |
| Emtricitabine | Gilead | Offert par Gilead | |
| FITC Anticorps anti-CD3 humains | Biolegend | 317306 | Pour la cytométrie en flux |
| Logiciel FlowJo | Pour l’analyse des données de cytométrie en flux | ||
| HIV-1 amorce directe : 5&prime ;-CAATGGCAGCAATTTCACCA-3&prime ;; | IDT | Personnalisé | Pour la charge virale RT-PCR |
| SONDE VIH-1 : 5&prime ;-[6-FAM]CCCACCAACAGGCGGCCT TAACTG [Tamra-Q]-3&prime ;; | IDT | Personnalisé | Pour la charge virale RT-PCR |
| HIV-1 amorce inverse : 5&prime ;-GAATGCCAAATTCCTGCTTGA-3&prime ;; | IDT | Personnalisé | Pour la charge virale RT-PCR |
| Tissu fœtal humain | Advanced Bioscience Resources, Inc | ||
| Souris, souche NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ | The Jackson Laboratory | 5557 | Pour la construction des souris humanisées |
| Pacific Blue anti-human CD45 | Biolegend | 304022 | Pour la cytométrie en flux |
| PerCP Anti-human CD4 Antibody | Biolegend | 300528 | Pour la cytométrie en flux |
| QIAamp Kits d’ARN viral | Qiagen | ; 52904 | Pour mesurer la charge virale |
| Raltégravir | Merck | Offert par Merck | |
| Racleurs de cellules stériles | Thermo Scientific | 179693 | Pour l’aliquotation des aliments |
| TARA TaqMan RNA-To-Ct 1-Step Kit | Applied Biosystems | 4392653 | Pour la détection de la charge virale plasmatique |
| Fumarate de ténofovir disoproxil | Gilead | Offert par Gilead | |
| Triméthoprime-sulfaméthoxazole | Pharmaceutical Associates | NDC 0121-0854-16 | Pour maintenir les aliments antirétroviraux stériles. Chaque cuillère à café de 5 ml contient 200 mg de sulfaméthoxazole >, 40 mg de triméthoprime < 0,5 % d’alcool |
Références
- Antiretroviral Therapy Cohort Collaboration. Life expectancy of individuals on combination antiretroviral therapy in high-income countries: a collaborative analysis of 14 cohort studies. Lancet. 372 (9635), 293-299 (2008).
- May, M. T., et al.
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Réimpressions et autorisations
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